Изготовление незамерзайки: Как изготовить незамерзайку за 5 минут в домашних условиях

Содержание

Как изготовить незамерзайку за 5 минут в домашних условиях

Все знают, что при нуле градусов из жидкого агрегатного состояния вода переходит в твердое, то есть попросту замерзает. Это, в свою очередь, несет много проблем для автомобилистов. Использовать обыкновенную воду в бачке омывателя совершенно небезопасно — может появиться трещина на бачке, могут разорваться резиновые шланги системы и не только. Чтобы важные функциональные узлы не вышли из строя, необходима специальная незамерзающая жидкость, которую в народе назвали “незамерзайкой”.

Если вы пользуетесь автомобилем практически каждый день, то покупать постоянно специальную жидкость в магазинах может быть слишком дорого. Однако вместо незамерзайки покупной можно заливать в бачок собственноручно изготовленную, ведь сделать незамерзайку своими руками совсем нетрудно, и конечно, она обойдется гораздо дешевле.

Из чего можно сделать незамерзайку?

Изготовление незамерзайки требует наличия определенных компонентов, наиболее доступными из них считаются:

Изопропиловый спирт. Он является самым популярным и безопасным компонентом;
Метиловый спирт. Самый дешевый, но очень вредный вариант. Для здоровья людей, которые находятся внутри автомобиля, а также для покрытия машины он не является безопасным;
Этиловый спирт. Является наиболее дорогим вариантом, для домашней незамерзайки этиловый спирт экономически невыгоден.

Учитывая все минусы и плюсы данных спиртов, наиболее рациональным видится использование изопропилового спирта для незамерзайки. Он известен своей хорошей стойкостью к температурам, а также безопасен для водителя и пассажиров.

Приготовление домашней незамерзайки на основе изопропилового спирта

Состав незамерзайки довольно прост: вода, изопропиловый спирт и моющее средство. Компоненты надо просто смешать в нужных пропорциях.

Шаг 1. Для начала возьмем подходящую канистру и наливаем в нее 2 литра воды. Поскольку вода из-под крана слишком жесткая, то ее нужно отфильтровать с помощью обычного бытового фильтра либо оставить ее постоять на несколько дней. Для приготовления незамерзайки в домашних условиях можно также использовать дистиллированную воду, что поможет избежать повреждения системы стеклоочистителей. Ведь некачественная вода оставляет со временем ржавчину, белые следы, налет на форсунках стеклоочистителей, внутри насоса бачка стеклоочистителей.

Шаг 2. Затем к воде добавляем 2 литра изопропилового спирта. Такой концентрации будет вполне достаточно для холодной погоды в большинстве случаев. Однако можно варьировать пропорции, исходя из температурных условий. Правило такое: чем холоднее, тем больше доля изопропилового спирта в составе незамерзайки. С определением пропорций изопропанола вам поможет следующая таблица:

Концентрация спирта об %	Концентрация спирта масса %	Температура замерзания °C
0	0	0
10	8	−4
20	17	−7
30	26	−15
40	34	−18
50	44	−21
60	54	−23
70	65	−29
80	76	−37*
90	88	−57*
100	100	−90*

*Наблюдается переохлаждение

Шаг 3. Еще одним компонентом в составе незамерзающей жидкости является моющее средство. Маленького колпачка на канистру в 5 литров будет вполне достаточно. Больше не нужно, чтобы избежать повышенного пенообразования, это будет неудобно для очистки стекол. Нужно выбирать качественное бытовое средство для мытья посуды, в составе которого нет хлора.

Шаг 4. Последнее, что вам останется сделать для получения домашней незамерзайки – это закрыть крышку и хорошенько взболтать содержимое. Изготовление незамерзающей жидкости отнимет у вас лишь несколько минут.

Проверка домашней незамерзайки на качество

Перед тем, как наливать полученную жидкость в машину, вам стоит проверить ее надежность. Для этого налейте небольшое количество жидкости в тару и поставьте на несколько часов ее на мороз. Если эта жидкость замерзнет либо станет гелеобразной, тогда добавьте в незамерзайку еще изопропанола, это усилит свойства незамерзайки.

Внимание! Храните незамерзающую жидкость для автомобилей в недоступных для детей местах.

Из чего еще можно сделать незамерзайку своими руками?

Сырьем для изготовления незамерзайки могут послужить и другие химические компоненты. Вот несколько доступных в быту рецептов незамерзайки:

С использованием этилового спирта. Подойдет любой этанол: это может быть медицинский спирт или средство для мытья окон на основе этилового спирта (посмотрите состав на этикетке). Пропорции незамерзайки должны быть 1:2 (1 часть спирта, 2 части воды). Потом добавляем столовую ложку стирального порошка и очень хорошо перемешиваем.
С использованием уксуса. Нужно смешать воду и уксус в одинаковых пропорциях: для одного литра незамерзайки необходимо тщательно перемешать 500 мл воды и 500 мл уксуса. Обратите внимание: работает только в том случае, когда температура воздуха -10 градусов.

С использованием аммиака. Берем 3 части воды и 1 часть аммиака и тщательно смешиваем. Но не допускайте пенообразования! Данная жидкость не совсем подойдет для очень низких температур. Если на улице сильный мороз, тогда добавьте в нее еще 100 гр. уксуса.
С использованием метанола. Для такой жидкости необходимо одна часть метанола и девять частей воды. Чтобы сделать очистку лобового стекла лучше, в эту жидкость можно добавить средство для мытья посуды (одна столовая ложка). Во время процедуры необходимо быть внимательными, чтобы из незамерзайки метанол не попал в дыхательные пути и в глаза.

Техника пользования незамерзайкой

1. Приготовленную незамерзайку залейте в бачок омывателя автомобиля. Как это правильно сделать, подсказывает видео, его полезно посмотреть начинающим водителям:

Необязательно перед этим выкачивать всю воду. Можно незамерзайкой заполнить лишь половину объема. В случае высокого качества жидкости она уже не замерзнет.

Запомните: “под завязку” заливать незамерзайку нельзя.

2. Прокачайте систему омывателя. Так необходимо сделать, чтобы летняя омывающая жидкость или вода вышли из шлангов, ведь они не способны держать низкие температуры. Незамерзайка для авто обычно имеет характерный запах из-за изопропилового спирта. Во время прокачивания системы омывателя вы сразу же почувствуете его. Это будет означать, что незамерзайка уже растеклась по системе.

Если вы не почувствуете запаха, проверьте так: нажмите на кнопку омывателя и на протяжении 30 секунд попрыскайте на стекла. Этого будет вполне достаточно, чтобы незамерзающая жидкость попала в систему омывателя.

Ну вот, теперь вы знаете как сделать незамерзайку для автомобиля своими руками и не переплачивать производителям. Изопропанол для незамерзающей жидкости вы можете купить в нашей компании.

Производство незамерзайки до -30

Незамерзающая жидкость для стеклоомывателя у нас в России является очень популярным товаром, особенно в зимнее время, поскольку обычная вода не только не справляется с маслянистыми загрязнениями, но и может стать причиной выхода из строя омывателя. Поэтому многие «умельцы» стараются заработать на этом и производят незамерзайку самым кустарным способом у себя в гараже.

Такая продукция является не только некачественной, но и опасной для употребления. Поскольку стремясь снизить стоимость, многие осуществляют производство незамерзайки с применением самого дешевого сырья – метилового спирта. Этот спирт очень опасен для здоровья человека, поэтому запрещён к производству незамерзайки в Российской Федерации.

Другая распространённая ошибка это производство незамерзайки путём простого смешивания спиртов с водой (далеко не всегда очищенной и качественной). Бесспорно, что подобная смесь возможно и не будет замерзать на морозе, но являясь очень агрессивной средой, будет разъедать пластиковые и резиновые части сетклоочищающей системы автомобиля. Она будет также разрушать и лакокрасочное покрытие автомобиля. Поэтому использование таких «кустарных» жидкостей может в последующем вылиться в копеечку, не говоря уже об опасности для здоровья. Что уж говорить про амбре, несущееся из салона автомобиля и разъедающее глаза всем, кто в нём находится.

Третьей большой ошибкой является использование некачественных или неподходящих по составу ПАВ (поверхностно-активных веществ), которые в результате оставляют на поверхности стекла обильную несмывающуюся пену. Из-за чего расходы незамерзайки увеличивается, а стекло так и остается грязным, с разводами. Произведенная таким образом незамерзайка не только не избавит вас от проблем, но и прибавит лишних!

Изготовление незамерзайки

Производить незамерзайку необходимо с соблюдением всех нормативных требований законодательства Российской Федерации. Наиболее качественными считаются незамерзайки, которые произведены на основе смеси различных спиртов. При этом в их состав добавляются различные отдушки для улучшения запаха, а также различные присадки, повышающие моющие качества жидкости и защищающие детали автомобиля от разрушений. В нашей компании качество стоит на первом месте, поэтому производство незамерзающей жидкости, купить которую можете по оптовым ценам, отвечает всем требованиям безопасности водителей. Самым дорогим и качественным сырьем считаются пищевые спирты (этанол или этиловый спирт и его производные). Это самые безопасные для здоровья человека спирты. Однако их использование в производстве придаёт жидкостям специфический сивушный запах, для нивелирования которого приходится использовать довольно дорогие отдушки и присадки.

«ПрофХим» предлагает вашему вниманию незамерзающую жидкость до -30 собственного производства. Нашим основным направлением является незамерзающая жидкость, изготовление которой ведётся с соблюдением всех норм. Мы производим незамерзающую жидкость только из высококачественного сырья, с применением специализированных отдушек и добавок. В ходе производства используется высокоочищенная вода, не оставляющая налёта в системе омывателя. Поэтому наша незамерзайка имеет все необходимые сертификаты качества, соответствия и разрешена к применению на всей территории РФ. Купить незамерзайку от производителя намного выгоднее и по цене и по качеству.

Мы изготавливаем незамерзайку с градацией температур в пять градусов (до –5°С, до –10°С, до –15°С…до –40°С). Вы можете заказать жидкость в разных регионах страны и выбрать любой цвет: синий, голубой, желтый, зеленый, розовый. Незамерзающая жидкость производство от «ПрофХим» фасуется в канистры по 4л. и 5л.

Компания «ПрофХим» осуществляет поставки в различные города и регионы России железнодорожным транспортом и фурами.

В Зеленограде закрыли незаконное производство «незамерзайки»

https://realty.ria.ru/20190627/1555960986.html

В Зеленограде закрыли незаконное производство «незамерзайки»

В Зеленограде закрыли незаконное производство «незамерзайки» — Недвижимость РИА Новости, 27.06.2019

В Зеленограде закрыли незаконное производство «незамерзайки»

В Зеленограде закрыли незаконное химическое производство, организованное в городских нежилых помещениях на проспекте Генерала Алексеева, дом 28, говорится в… Недвижимость РИА Новости, 27.06.2019

2019-06-27T10:40

происшествия

зеленоградский административный округ

москва

госинспекция по недвижимости

/html/head/meta[@name=’og:title’]/@content

/html/head/meta[@name=’og:description’]/@content

https://cdnn21. img.ria.ru/images/150953/17/1509531724_0:207:4173:2554_1920x0_80_0_0_97686b28d946137da7eeed8e67cf6b5f.jpg

МОСКВА, 27 июн — РИА Недвижимость. В Зеленограде закрыли незаконное химическое производство, организованное в городских нежилых помещениях на проспекте Генерала Алексеева, дом 28, говорится в сообщении московской Госинспекции по недвижимости.В помещениях были размещены двухсотлитровые бочки с сырьем для изготовления незамерзающей стеклоомывающей жидкости, а также технологическое оборудование для смешивания и разлива готовой продукции. Готовый товар складировался там же, на стеллажах.За нарушение организация привлечена к административной ответственности. Химическое производство остановлено, технологическое оборудование вывезено, нарушение при использовании нежилых помещений, находящихся в собственности города, устранено, добавляется в материале.

зеленоградский административный округ

москва

Недвижимость РИА Новости

[email protected]

7 495 645-6601

ФГУП МИА «Россия сегодня»

https://xn--c1acbl2abdlkab1og. xn--p1ai/awards/

2019

Недвижимость РИА Новости

[email protected]

7 495 645-6601

ФГУП МИА «Россия сегодня»

https://xn--c1acbl2abdlkab1og.xn--p1ai/awards/

Новости

ru-RU

https://realty.ria.ru/docs/about/copyright.html

https://xn--c1acbl2abdlkab1og.xn--p1ai/

Недвижимость РИА Новости

[email protected]

7 495 645-6601

ФГУП МИА «Россия сегодня»

https://xn--c1acbl2abdlkab1og.xn--p1ai/awards/

https://cdnn21.img.ria.ru/images/150953/17/1509531724_365:0:3889:2643_1920x0_80_0_0_022682eae09a36bf2cf2b5aa9645f597.jpg

Недвижимость РИА Новости

[email protected]

7 495 645-6601

ФГУП МИА «Россия сегодня»

https://xn--c1acbl2abdlkab1og.xn--p1ai/awards/

Недвижимость РИА Новости

[email protected]

7 495 645-6601

ФГУП МИА «Россия сегодня»

https://xn--c1acbl2abdlkab1og.xn--p1ai/awards/

происшествия, зеленоградский административный округ, москва, госинспекция по недвижимости

МОСКВА, 27 июн — РИА Недвижимость. В Зеленограде закрыли незаконное химическое производство, организованное в городских нежилых помещениях на проспекте Генерала Алексеева, дом 28, говорится в сообщении московской Госинспекции по недвижимости.

«В ходе обследования нежилых помещений, предоставленных городом в аренду, было установлено, что вместо оружейного магазина функционирует цех по разливу химических жидкостей», — отмечается в нем.

В помещениях были размещены двухсотлитровые бочки с сырьем для изготовления незамерзающей стеклоомывающей жидкости, а также технологическое оборудование для смешивания и разлива готовой продукции. Готовый товар складировался там же, на стеллажах.

За нарушение организация привлечена к административной ответственности. Химическое производство остановлено, технологическое оборудование вывезено, нарушение при использовании нежилых помещений, находящихся в собственности города, устранено, добавляется в материале.

Незамерзайка своими руками в домашних условиях: состав, пропорции.

Зима, холода – обычную воду в бачек омывателя авто не зальешь — замерзнет. Как раз для таких экстремальных зимних температур и была разработана незамерзающая жидкость. В 10, 15 и даже 30 градусный мороз, такая жидкость делает лобовое стекло чистым и без разводов. Все дело в составе незамерзайки.

Основные компоненты состава незамерзайки:

Вода. Основной компонент незамерзайки составляет большую часть объема.
Спирт. Этот компонент как раз и делает незамерзающую жидкость незамерзающей. Чем больше спирта, тем ниже температура замерзания. Как правило, используют следующие спирты:

Метиловый – имеет низкую температуру замерзания, низкую стоимость, но является ядовитым, при попадании в организм человека способен вызвать слепоту или привести к летальному исходу. Поэтому на территории России изготовление незамерзайки из метилового спирта запрещено.

Этиловый – не имеет неприятного запаха, не ядовит для человека. Правда, незамерзайку в состав которой входит этиловый спирт практически невозможно найти на прилавках, из-за дороговизны спирта (не выгодно).

Изопропиловый — не ядовит для человека, имеет неприятный запах. В основном такой спирт используют для производства незамерзайки и надо помнить, чем ниже температура замерзания жидкости, тем сильнее будет неприятный запах.

Краситель и ароматизаторы. Используют для предания стороннего запаха, например, яблоко, дыня и так далее. Соответственно и краситель используют под стать ароматизатору для яблока — зеленый, для дыни – желтый. В основном используется для маркетинга, для привлечения внимания покупателя.
Моющие средства. Вспомогательный компонент, который улучшает чистящие характеристики жидкости.

Теперь зная состав незамерзайки, вы может ее без труда приготовить дома или даже в гараже. На самом деле вам будут необходимы всего три компонента.

Как сделать незамерзайку в домашних условиях.

Существует два способа изготовления незамерзайки в домашних условиях – это народный рецепт и магазинный. Итак, приступим.

Народный рецепт.

Для изготовления незамерзайки потребуется следующие пропорции:

Бутылка самой дешевой водки 0.5 литра;
Вода 2 литра;
Моющие средство для посуды (фери) две-три капли.

Если вы хотите, чтобы ваша незамерзайка была более устойчивой к холоду, то уменьшите пропорцию воды. Запомните, чем больше водки, тем ниже температура замерзания воды.

Магазинный способ.

На прилавках автомагазинов есть концентраты незамерзающей жидкости, как говориться просто добавь воды, согласно инструкции.

Более способов изготовления незамерзайки дома мне не ведомо, так как приобрести в свободном доступе спирт не так уж и легко. Можно конечно использовать соляные или уксусные растворы, соленая вода тоже плохо замерзает. Однако, соль и уксус губительны для некоторых элементов автомобиля, например, кузова, резинок и так далее, да и белые разводы на стекле нам не к чему.

Покупая незамерзайку остерегайтесь подделок. Старайтесь покупать незамерзайку в прозрачной таре, у которой не должно быть осадка на дне, при взбалтывании канистры должна образовываться пена, пробка должна быть ровно и плотно закрыта, а на этикетке должна быть полная информация о продукте.

И в заключении хотелось бы добавить о том, что делать, если замерзла незамерзайка. Тут ответ один, для начала, нужно прогреть автомобиль в стоячем положении, до срабатывания системы принудительного охлаждения (вентилятора). Затем, заглушить двигатель и дать автомобилю немного постоять минут 15 – 20 и бачек и трубки за это время должны отойти от мороза, добавить водки или незамерзайки с более низкой температурой замерзания и обязательно пролить систему (несколько раз обильно помыть стекло). Если замерзли форсунки, то тут спасет только тряпка, обмоченная в кипятке.

Отзывы о незамерзайках оставляйте, пожалуйста, в комментариях. Спасибо.

Борьба с незамерзайкой. Правительство намерено взять метанол под полный контроль

Об этом Business FM сообщил вице-президент Национального автомобильного союза Антон Шапарин. Как это отразится на автомобилистах?

Фото: Сергей Бобылев/ТАСС

Дмитрий Медведев даст окончательный бой торговцам незамерзайкой на обочинах. Об этом Business FM сообщил вице-президент Национального автомобильного союза Антон Шапарин.

Минпромторг разрабатывает новые правила контроля за оборотом метанола. Они существенно усложнят доступ к этому продукту для нелегальных производителей антифризов, тосолов и стеклоомывательных жидкостей. Предполагается контроль от производителя до конечного потребителя. Также усиливается ответственность за нелегальное использование этого сырья. Конечная цель — исключение метанолсодержащих жидкостей в автомобиле.

Сейчас до 9% всего метанола попадает на черный рынок. Это 450 тысяч тонн в год — многомиллиардная индустрия, которой, по решению Дмитрия Медведева, будет дан бой. Ожидается, что кабмин рассмотрит проект постановления в обозримой перспективе. Минпромторг внесет его в правительство в ближайшее время.

Как это коснется потребителей? На этот вопрос Business FM ответил участник экспертной группы Минпромторга, вице-президент Национального автомобильного союза Антон Шапарин:

Антон Шапарин вице-президент Национального автомобильного союза

Оборот метанола в России и так серьезно ограничен — вплоть до 234-й статьи Уголовного кодекса. В начале 2000-х годов Роспотребнадзор запретил производство незамерзайки на его основе, чтобы случайно не отравились те, кто пробует пить этот продукт: метанол смертелен, если принимать его внутрь.

Тем не менее запрет на использование метанола партнер аналитического агентства «Автостат» Игорь Моржаретто считает ошибкой:

Игорь Моржаретто партнер аналитического агентства «Автостат»

Россия поставляет метанол на экспорт и поэтому держит на него низкие цены, признал представитель Минпромторга. Получается, европейские автолюбители будут использовать незамерзайку на основе дешевого российского сырья, а россиян вынудят заливать в бак дорогой продукт.

Добавить BFM.ru в ваши источники новостей?

Производство незамерзающей жидкости как бизнес

Для начинающих бизнесменов, которые решили наладить производство незамерзающей жидкости как бизнес, на начальном этапе не понадобятся большие вложения.

Весь процесс можно организовать и в домашних условиях, например, в гараже. Все что нужно: небольшое помещение, установка и ингредиенты.

Без незамерзающей жидкости нельзя обойтись, это подтвердит любой автомобилист. А поскольку число транспорта на дорогах с каждым годом увеличивается, это приводит к тому, что подобный продукт становится более востребованным.

Краткое содержание материала:

Грамотно организованный бизнес по производству незамерзайки станет прибыльным и стабильным, невзирая на масштабы бизнеса.

Техническая жидкость, именуемая в народе «незамерзайка», используется для предотвращения перегрева двигателя, не допускает появления накипи в системе охлаждения, применяется для смазки термостата и частей водного насоса.

Конкуренция

Перед тем, как открыть производство незамерзающей жидкости, изучите конкурирующие организации и тщательно проанализируйте рынок предложений. Подобный анализ поможет понять: выстоит ли ваш бизнес в конкурентной борьбе.

Выводы о рентабельности предприятия можно сделать как следует ознакомившись со всеми торговыми точками региона, продающими незамерзайку, их ценами и себестоимости производства. На основании этих данных проводится сравнительный анализ.

Помещение

В помещение, где предполагается изготовление незамерзайки, требуется следующие коммуникации: электроснабжение, подача воды, канализация, вентиляция.

Желательно выбрать помещение размером не менее 100 кв. м., поскольку в него войдет цех для производства, склады для сырья и готовой продукции, технические помещения и комната для отдыха сотрудников.

Без хорошо работающей вентиляции обойтись нельзя, поскольку в состав продукта входит изопропиловый спирт, который выделяет вредные пары.

И поскольку вредность производства повышена, выбирать помещение следует в промышленной зоне города. Расстояние до ближайших жилых объектов не менее 500 метров.

Когда проведены все расчеты и сомнений в рентабельности бизнеса не возникает, приступаем к реализации проекта.

Оборудование

Следующим этап — выбор оборудования для производства незамерзающей жидкости.

Основные элементы линии включают:

Тепловой реактор;
Резервуар для смешивания;
Устройство для приклеивания этикеток;
Емкости для жидких веществ.

Технология производства незамерзайки предусматривает использование только очищенной воды, поэтому понадобятся специальные фильтры.

Ингредиенты

В состав незамерзайки для авто входит:

Изопропиловый спирт – главный ингредиент, не допускающий замерзания при отрицательных температурах. Чем выше концентрация спирта, тем ниже температура не замерзания.
Вода, очищенная от солей.
ПАВы (поверхностно активные вещества), помогающие убирать грязь со стекол авто.

Это главные составляющие сырья.

Некоторые производители используют и вспомогательные компоненты:

Этиленгликоль — придаёт незамерзайке текучесть при отрицательной температуре.
Отдушки, придающие приятный аромат.
Краситель, окрашивающий жидкость в привычный голубой цвет.

Персонал

Обслуживание небольшого производства по силам 1-3 людям. Персоналу не потребуется особой подготовки.

Главное условие — строгое соблюдение ТУ, техники пожарной безопасности и санитарных норм. Поскольку вещества, используемые для изготовления, обладают высокой горючностью и ядовитостью.

Для контроля работы бригады можно нанять менеджера, который будет следить за качеством работы, соблюдением технологического процесса, разбираться со сбытом и приемом заказов.

Нелишним будет пригласить для работы профессионального химика, задача которого контролировать качество выпускаемой продукции.

Еще необходим специалист в бухгалтерии и другой документацией.

Процесс производства

Как было отмечено, изготовить незамерзайку в домашних условиях легко, следовательно, чтобы начать бизнес необязательно быть профессиональным химиком. Рецептура изготовления незамерзайки весьма обширна.

Этапы приготовления жидкости:

Фильтрация воды для ее очистки;
Перемешивание ингредиентов;
Термическая обработка жидкости;
Розлив в емкости для сбыта;
Наклейка этикеток;
Упаковка и складирование.

Вне зависимости от состава, технология создания не меняется.

Сезонность

Летом незамерзающая жидкость не востребована — это логично! Поэтому многие считают, что незамерзайка как бизнес актуальна только в зимние месяцы. Однако это неверно: некоторые изменения в технологии и торговля незамерзающей жидкостью доступна летом.

К примеру, смешивание очищенной воды и доли спирта — получается омыватель для фар или стекол.

Кто-то считает бизнес на производстве незамерзайки невыгодным именно из-за сезонности, но это не так!

Сбыт

Каналы сбыта подыщите заранее, еще до того, как начнете делать незамерзайку для продажи. Займитесь этим на этапе составления бизнес-плана.

Преимущественный поток — это магазины, продающие автохимию. Чтобы проблем со сбытом не возникало, лучше попробуйте заключать договор о поставке с оптовыми клиентами.

Но это не единственный вариант сбыта готовой продукции.

Рассмотрите также:

Автозаправки и СТО;
Автосалоны;
Торговые центры и магазины;
Компании, занимающиеся логистикой;
Крупные торговые сети;
Торговля на дороге, трассе (данный способ предполагает наличия соответствующих документов, отсутствие которых грозит штрафом).

Варианты, которые редко используются предпринимателями в данной сфере, но и они не менее действенные:

Доставка жидкости на дом покупателю
Продажа незамерзайки посредством интернет-магазина
Продажа через торговые аппараты
И конечно, традиционная реклама: газеты и прочие СМИ, расклейка объявлений и т.д.

Познавательное видео к просмотру для нашей аудитории

Еще записи по теме

Свой бизнес: производство «незамерзайки»

Незамерзайка – так автолюбители называют зимнюю стеклоомывающую жидкость. На ее изготовлении и продаже можно организовать достаточно прибыльный бизнес, объемы потребления незамерзайки постоянно растут, связано это с увеличением числа автомобилей.

Конкуренция среди производителей низкая, на рынке представлена или уж слишком дорогая импортная продукция, или откровенно низкокачественная, дешевая. Игрок, способный предложить достойное качество по разумной цене, может легко занять пока еще пустующую нишу.

Специфика бизнеса

Реализация бизнес-идеи начинается с регистрации деятельности. Самая оптимальная форма ООО. Стоит учитывать, что незамерзающая стеклоочистительная жидкость подлежит сертификации, санитарно-эпидемиологической оценке и на нее выдается лабораторное свидетельство на соответствие стандартам. Для производства незамерзайки запрещено использовать метиловый спирт из-за его токсичности (карается законом с лишением свободы), но можно этиловый или изопропиловый. При поиске поставщиков сырья сразу стоит требовать документы, подтверждающие легальный способ получение этанола.

Помещение

Необходимые для производства незамерзайки площади – это 200-300 кв.м. Сам цех займет около 100 кв.м. Остальное – подскладские, административные, лабораторные зоны. Желательно размещать производство на окраине города или даже за его чертой. Ключевые требования к помещению – наличие профессиональной системы вентиляции и кондиционирования воздуха, реализация мер по пожарной безопасности, т.к. спирты относятся к опасным и быстро возгораемым веществам.

Оборудование

Перечень оборудования, необходимого для изготовления незамерзайки, таков: реактор, смеситель, емкости и резервуары для хранения жидкости, трубопроводная обвязка, насос, поршневой компрессор, запорное устройство, линия по разливу в тару, оборудование для нанесения этикетки.

Стоимость полностью укомплектованной, автоматической производственной линии зависит от ее мощности, в среднем составит порядка 15 000 $ (объемы на выходе: 5000 л /24 ч). Новая линия по разливу и нанесению этикетки стоит от 6 до 9 тысяч у.е.

Сырье и персонал

Основной состав незамерзайки – это спирт, вода, моющие средства, красители и ароматизаторы. Все чаще в последнее время используется доступный по цене изопропиловый спирт или смеси нескольких спиртов. У каждого производителя может быть свой уникальный «рецепт», в какой пропорции смешать компоненты. Конечно же, чтобы создать качественный и безопасный для здоровья продукт, не обойтись без помощи химиков.

Для небольшого производства достаточно 1-2 человек. Средняя зарплата таких специалистов 900-1000 $. Хотя, если компания экономит средства на старте бизнеса, можно заказать разработку состава у сторонней лаборатории. Наличие собственного отдела разработок влечет затраты на покупку химического лабораторного оборудования – минимум 6000 дол., но позволяет расширять ассортимент выпускаемой продукции в кратчайшие сроки. Кроме химиков потребуется несколько операторов на линию, подсобные рабочие, кладовщик, грузчик. Всего около 10 человек.

Самое важное в этом бизнесе — найти надежного поставщика спирта. Желательно выйти напрямую на производителя, а не переплачивать посредникам. Средняя цена 1 л оптом – 2,5$. Расход спирта зависит от типа омывающей жидкости, чем выше порог «незамерзания», тем дороже жидкость.

Тару также дешевле заказывать на стороне, как и услугу нанесения на нее этикетки. В итоге себестоимость 5 литровой бутылки незамерзайки с порогом до -10 градусов составляет 0,75-1$.

Рынки сбыта и прибыль

Каналы сбыта: авторынки, магазины автохимии, оптовые и розничные базы товаров для автомобилей, можно создать собственный сайт, но тогда для него нужен ассортимент.

Незамерзайка – товар, который реализуется в больших количествах зимой. Иногда спрос превышает предложения. 5 литровой канистры хватает на 1-2 недели использования.

При доходе с канистры в 0,4 у.е. и реализации 1000 канистр в месяц, можно получить до 12000 $ дохода, вычтя основные расходы (аренда, зарплата, коммунальные платежи, закупка сырья, налоги) – чистая прибыль составит 3000-5000$. Но для этого сбыт должен быть налажен наилучшим образом.

Самый большой минус бизнес-идеи – сезонность. Хотя многие предприниматели переориентируются на выпуск летней стеклоомывающей жидкости, но она не такая востребованная и дорогая, как зимняя. Поэтому в качестве варианта заработка на летний период стоит рассмотреть изготовление прочей автохимии.

Производство антифриза — Blending.GlobeCore.com

Антифриз — вещество, которое массово используется автовладельцами для чистки лобовых стекол в холодное время года. Несмотря на кажущуюся сложность процесса изготовления антифриза, он достаточно прост и при желании продукт можно изготовить даже в домашних условиях.

Для этого требуется спирт, очищенная вода, этиленгликоль, отдушки, поверхностно-активные вещества и красители. Это оригинальные компоненты, которые используют современные производители антифризов.

Выбор спирта во многом определяется тем, какие вещества разрешены для использования в автомобильной химии в конкретной стране. Вода должна быть предварительно очищена и не должна иметь осадка. Что касается цвета, то здесь нет необходимости изобретать велосипед. Вы можете выбрать традиционный голубой оттенок.

Технология производства антифриза

включает следующие последовательные этапы:

очистка воды;
смешивание всех ингредиентов;
нагрев смеси;
розлив готовой продукции.

При работе с небольшими объемами жидкости в домашних условиях не должно возникнуть проблем ни на одном из этапов. В случае промышленного производства антифризов, вероятно, наиболее важен второй этап. Смешать большое количество сырья не так просто, учитывая, что необходимо следить за тем, чтобы оно не распалось на отдельные компоненты при последующем хранении и использовании по назначению. Поэтому к выбору оборудования для купажирования нужно подходить очень внимательно и внимательно.

Со своей стороны мы можем рекомендовать установки USB-типа разработки GlobeCore . Это оборудование предназначено для смешивания нескольких компонентов и получения высокостабильных смесей.

При использовании обычных методов смешивания, известных на сегодняшний день, антифриз имеет тенденцию разрушаться при добавлении отдельных компонентов.

Особенностью предлагаемой установки является использование метода закачки и гидродинамического удара, который может обеспечить стабильность полученного продукта не менее 180 суток.

Современные гидродинамические (поточные) смесительные установки зарекомендовали себя в промышленности как рентабельные, точные и надежные средства производства высококачественных незамерзающих жидкостей с оптимальной стоимостью. Достижимая экономия затрат и повышение рентабельности по сравнению с традиционной технологией смешивания компонентов в специальных емкостях может ускорить окупаемость инвестиций до 60% в год и обеспечить окупаемость проекта в течение одного года или меньше.

Antifreeze — обзор | Темы ScienceDirect

Антифризные белки

Известно, что растения и пойкилотермные животные, такие как насекомые и холодноводные рыбы, защищают себя от замерзания как антифризами, такими как гликоли, так и специальными пептидами и гликопептидами, которые действуют как антифризные белки и гликопротеины. препятствуя росту кристаллов льда (Klomp et al., 1997). Гликопептиды, состоящие из аланина, треонина, галактозы и N -ацетилгалактозамина, присутствуют у животных в антарктическом регионе. У других северных рыб были обнаружены пептиды, содержащие аланин, аспартат, глутамат, треонин и серин (DeVries, 1982).

Микробы демонстрируют необычайное разнообразие приспособлений к экстремальным условиям. Термофилы — это организмы, которые выживают при температурах, близких к температуре кипения воды, а психрофилы — это бактерии, которые переносят необычно низкие температуры.Чтобы выжить при температурах ниже точки замерзания обычной воды, эти микробы защищаются от растущих кристаллов льда, которые могут повредить клеточные мембраны. Они производят криопротекторы, которые снижают температуру зародышеобразования для льда. Эти криопротекторы включают белки зародышеобразования льда (Walker et al., 2008). Рост кристаллов льда можно подавить даже в присутствии небольших количеств таких веществ. Скорости гомогенного зародышеобразования и кристаллизации чувствительны к низким концентрациям.

Антифризная активность гликопротеинов является результатом сорбции белка на активных участках роста кристаллов льда (Franks et al., 1987). По мере того как белки адсорбируются, они изменяют кривизну поверхности, что очень затрудняет зарождение и рост кристаллов льда (Walker et al., 2008). Напротив, зародышевые белки предотвращают сильное переохлаждение и позволяют образовывать лед, близкий к температуре замерзания. Белки-антифризы проявляют три вида активности (Wang, 2000):

1.: Они могут поддерживать переохлажденное состояние жидкостей организма, подавляя обычный рост льда,
2.: Они обладают способностью препятствовать перекристаллизации и
3.: Они могут служить плазмой. мембранные протекторы при низких температурах.

Белки-антифризы подразделяются на несколько основных типов, которые приведены в таблице 13.12 (Tokunaga et al., 2008).

Таблица 13.12. Типы антифризов

Тип	Характеристики
I	Одинарная длинная амфипатическая α -спираль
II	Глобулярные белки, богатые цистеином, с дисульфидными фрагментами
III	Общая гидрофобность сходна с белками типа I
IV	α -Справочные белки, богатые глутаматом и глутамином
V	Великое значение теплового гистерезиса

Эффект типа I Исследован белок-антифриз рыб из озимой камбалы Pleuronectes americanus (Walbaum) на образование клатрат-гидрата тетрагидрофурана.Белок-антифриз действует, изменяя морфологию кристаллов клатрат-гидрата с октаэдрической на пластинчатую. Белок кажется более эффективным, чем поливинилпирролидон. Кроме того, эксперименты предполагают, что рост пропан-гидрата также может быть ингибирован (Zeng et al., 2003).

В качестве задействованного механизма была предложена поверхностная адсорбция. После того, как молекулы белка прикрепляются к поверхности льда, рост кристаллов льда становится неблагоприятным в области между адсорбированными молекулами белка, поскольку они вызывают увеличение кривизны поверхности.Эта кривизна впоследствии препятствует дальнейшему росту кристаллов льда (Zeng et al., 2005).

Низшие спирты, гликоли и неорганические соли являются депрессантами точки плавления, то есть антифризами, которые можно использовать для предотвращения образования гидратов. Однако при высоких степенях переохлаждения, наблюдаемых в глубоких водах, их необходимо добавлять в значительных количествах, до количеств, равных количеству добываемой воды, чтобы они были эффективными (Klomp et al., 1997).

Для ингибирования газовых гидратов были предложены не только сами белки-антифризы, но и производные из них активные фрагменты, а также миметики белков-антифризов.Подходящие белки или фрагменты содержат Р-спираль или 3-спирали, Р-валик, гликопротеин или глобулярную структуру. Такие антифризы могут быть получены из животных, растений, грибов, простейших или бактерий (Walker et al., 2003). Специальные примеры белков-антифризов приведены в Таблице 13.13.

Таблица 13.13. Белки-антифризы (Walker et al., 2003)

Происхождение	Ссылка
Насекомые
Жук-мучной червь ( T.molitor )	Graham et al. (1999)
Червь еловая ( C. fumiferana )	Walker et al. (1999)
Жук молочая ( Oncopeltus fasciatus )	Patterson et al. (1981)
Dendroides canadensis	Duman (1997)
Растения
Ржаная трава ( Lolium perenne )	Kuiper et al.(2001)
Паслен горько-сладкий ( Solanum dulcamara )	Worrall et al. (1998)
Озимая рожь ( Secala cereale )	Worrall et al. (1998)
Морковь ( Daucus carota )	Byass et al. (2000)

Дезоксирибонуклеиновые кислоты (ДНК), кодирующие антифризные белки Tenebrio molitor , были выделены и, как было обнаружено, кодируют 7-13 кДальтон, богатые цистином белки, состоящие в основном из 12 повторяющихся аминокислотных единиц (Graham et al. al., 1997, 1999). ДНК Choristoneura fumiferana , кодирующая антифризные белки размером 9–12 кДальтон, также была клонирована (Doucet et al., 2002).

Треонины соответствуют решетке льда в моделях антифриз протеин / лед. В некоторых белках-антифризах треонины заменены валином или изолейцином, которые представляют собой аминокислоты с метильными группами и пространственными объемами, аналогичными треонину. Считается, что неполярные взаимодействия могут быть важны для подавления роста льда (Walker et al., 2003). Белки-антифризы из насекомых обладают большей активностью, чем белки-антифризы из рыб, на 1-2 порядка. К сожалению, несмотря на их замечательные характеристики, их производство и использование в нефтяных месторождениях было сочтено неэкономичным (Klomp et al., 1997).

Протеины-антифризы — обзор

17.6.2 Протеины-антифризы

Протеины-антифризы (AFP) — это биомолекулы, которые естественным образом обнаруживаются в крови водных животных из окружающей среды с холодной водой (Ding et al., 2015; Meister et al., 2013). AFP не предотвращает замерзание, а, скорее, препятствует росту и перекристаллизации льда, взаимодействуя со льдом из-за их гидрофильных характеристик, вызывая снижение их точки замерзания без изменения точки плавления по неколлигативному механизму (Cao et al., 2016). AFP различаются по первичной, вторичной и третичной структуре. Среди них ВЭЖХ6 и ss3 являются наиболее известными и охарактеризованными АФП типа 1 (37- и 33-аминокислотные богатые аланином α-спиральные белки, соответственно), которые естественным образом обнаруживаются у озимой камбалы ( Pseudopleuronectes americanus ) и короткохвостого бычка ( Myoxocephalus scorpius ) соответственно.АФП типа 2, обнаруженный у морского ворона ( Hemitripterus americanus ), радужной корюшки ( Osmerus mordax ) и атлантической сельди ( Clupea harengus ), представляют собой богатые цистеином белки (11–22 кДа), стабилизированные дисульфидными связями. АФП 3-го типа, обнаруженные в океанической надуве ( Zoarces americanus ) и волчьей ( Anarhichas lupus ), представляют собой глобулярные белки (6,5 кДа), богатые β-пластинчатой структурой, в то время как АФП 4-го типа обнаруживается у длиннорогого бычка ( Myoxocephalus octodecimspinosis ). , являются белками, богатыми аланином или глутамином / глутаматом (6.5 и 12 кДа соответственно) (Harding et al., 2003; Ustun, Turhan, 2015).

Гликопротеины антифриза (AFGP), связанные с дисахаридом β-d-галактозил (1 → 3) -α- N -ацетил-d-галактозамин в повторяющейся последовательности (Ala-Ala-Thr / Arg) n , обычно встречаются у некоторых антарктических нототениоидов и северных видов трески (Harding et al., 2003; Venketesh, Dayananda, 2008).

Криозащитный эффект AFP был оценен при криоконсервации тканей, клеток и органов (Wen et al., 2014). В пищевой промышленности AFP использовался в замороженных молочных и мясных продуктах для сохранения их сенсорных и текстурных характеристик (Boonsupthip and Lee, 2003; Li and Sun, 2002; Regand and Goff, 2006).

В последнее время из-за ограниченного природного изобилия нативного AFP для медицинских и промышленных применений было изучено производство AFP и / или аналогичных соединений с помощью рекомбинантной технологии и химического синтеза (Ustun and Turhan, 2015). Гидролиз белков морепродуктов для производства AFP показал многообещающие результаты (Halwani et al., 2014). В этом отношении гидрофильный пептид (GAIGPAGPLGP, 906 Да) из гидролизата коллагена кожи акулы (SH) проявлял криопротекторные свойства, индуцируя устойчивость к холоду у чувствительных к замораживанию организмов. 90,3% выживаемости Lactobacillus bulgaricus при низкой температуре было получено при использовании SH в концентрации 250 мкг / мл (Wang et al., 2014). Гидролизаты толстолобика ( Hypophthalmichthys molitrix ) также показали антифризную активность, аналогичную или более высокую, чем у обычных криопротекторов (8% сахароза: сорбит, соотношение 1: 1) для сохранения свойств атлантической трески ( G . morhua ) фарш даже после шести циклов замораживания-оттаивания (Mueller and Liceaga, 2016). Дальнейшие исследования криозащитных функций гидролизатов рыбьего белка представляют собой привлекательный вариант для замены или комбинирования обычных криопротекторов, тем самым расширяя их использование в пищевой промышленности для сохранения качества продуктов, требующих замораживания или хранения замороженных продуктов.

Белки и липиды являются основными мышечными компонентами морепродуктов, подверженными порче при хранении. Пептиды, полученные из гидролизатов морепродуктов с бифункциональными свойствами, были охарактеризованы и могут быть использованы в качестве антиоксидантов и криопротекторов для замедления окисления липидов и денатурации белков.Некоторые пептиды из кожного желатина амурского осетра проявили антиоксидантную и криопротекторную активность в немытом рыбном фарше, подвергнутом 3–6 циклам замораживания-оттаивания (20 часов замораживания при -18 ° C и 4 часов оттаивания при 4 ° C) (Nikoo et al. ., 2015). Другой источник бифункциональных пептидов включает кожный желатин рыб-единорогов ( Aluterus monoceros, ) (Nikoo and Benjakul, 2015; Karnjanapratum and Benjakul, 2015).

Что такое антифриз? | Блог химии

Антифриз — это добавка, которая может использоваться для понижения точки замерзания, а также повышения температуры кипения любой жидкости на водной основе.Одним из распространенных примеров является автомобильная промышленность, где антифриз в форме этиленгликоля добавляется к воде в качестве охлаждающей жидкости двигателя в транспортных средствах и предотвращает замерзание двигателя при низких температурах.

Если было использовано мало или совсем не было антифриза, а вода замерзла в двигателе, это привело бы к огромному внутреннему давлению из-за расширения, что привело бы к серьезному повреждению двигателя. Точно так же перегретый двигатель может иметь разрушительные (и дорогостоящие) последствия. Забота о охлаждающей жидкости для вашего автомобиля — ключ к успеху!

Из чего сделан антифриз?

Антифриз может быть изготовлен с использованием любого из этих четырех основных агентов, смешанных с водой: метанола, глицерина, этиленгликоля и пропиленгликоля.У каждого агента есть свои преимущества и недостатки, в зависимости от того, как вы хотите его использовать.

Метанол: легковоспламеняющаяся, токсичная жидкость. Метанол используется в жидкости для омывателя лобового стекла и в антиобледенительных устройствах.
Глицерин (также называемый глицерином): нетоксичный и способный выдерживать более высокие температуры, чем его аналоги, глицерин был первым антифризом, используемым в автомобильных двигателях. Иногда его называют «природным антифризом». Его производят из животных и растительных веществ.
Этиленгликоль: наиболее распространенный автомобильный антифриз, используемый вместо глицерина из-за его более низкой точки замерзания, хотя он токсичен для человека.Этиленгликоль также является лучшим антифризом для защиты как от низких, так и от высоких температур благодаря своим характеристикам теплопередачи.
Пропиленгликоль: менее токсичен, чем этиленгликоль, но для достижения того же результата его необходимо использовать в больших количествах. Идеально подходит для использования там, где этиленгликоль может быть опасен, например, в пищевой промышленности.

Эти составы могут продаваться в виде концентрата или разбавленного водой. Разведение 50%: 50%, что дает температуру замерзания примерно -37 ° C (-34.6 ° F), как правило, используется в Великобритании, но в более теплом или холодном климате при необходимости используются более слабые или более сильные разведения.

Антифриз может также содержать другие добавки, такие как фосфаты и силикаты, которые помогают защитить от коррозии и роста биологических веществ. Преимущество этого заключается в том, что если позволить коррозии или биологическим веществам накапливаться, они могут ограничить действие антифриза и вызвать повреждение.

Почему антифриз бывает разных цветов?

Возможно, вы знаете, что антифриз бывает разных цветов, от красного и синего до зеленого и оранжевого, который создается путем добавления красителя.Почему? В основном по историческим причинам — разные цвета отражали либо место изготовления продукта, марку, которая его производила, либо тип содержащегося в нем химиката, предотвращающего коррозию.

Например, в более старых антифризах использовалась технология неорганических добавок, и они были либо синими, либо зелеными. По мере развития технологий антифризы перестали содержать силикаты и использовали технологию органических кислот. Эти антифризы с увеличенным сроком службы обычно были оранжевого цвета. В наши дни цвет не отражает сам продукт, поэтому нелегко определить, какие химические вещества содержит антифриз, просто посмотрев, является ли он синим, зеленым, желтым или оранжевым.

Антифриз — это то же самое, что охлаждающая жидкость?

Термины «антифриз» и «охлаждающая жидкость», относящиеся к жидкости в системе охлаждения двигателя, могут использоваться как синонимы, поскольку оба они описывают жидкость, которая помогает двигателю работать при нужной температуре.

Разница между антифризом и охлаждающей жидкостью заключается в том, что двигатель необходимо охлаждать до нужной температуры 365 дней в году независимо от погоды, а это означает, что охлаждающая жидкость требуется двигателю в любое время.В холодное время года антифризные свойства охлаждающей жидкости должны предотвращать замерзание жидкости.

История антифриза

Шарль Адольф Вюрц, французский химик, открыл этиленгликоль в конце 1850-х годов, но не смог найти ему применения. Примерно пятьдесят лет спустя было обнаружено, что этиленгликоль является отличным хладагентом, а также использовался в качестве замены глицерина при взрывах во время Первой мировой войны. После войны он производился в больших количествах для охлаждающих жидкостей двигателей и стал революционным в развитии как автомобильной, так и авиационной промышленности.У антифриза, каким мы его знаем сейчас, есть множество применений.

Характеристики антифриза

Антифриз синий — готов к использованию

Описание	Пределы	Шт.
Внешний вид	Прозрачная голубая жидкость, не содержащая частиц
Плотность при 20 ° C	1,055 — 1,075	г / мл
Содержание моноэтиленгликоля	47–50	% по массе
Соответствует BS 6580 2010
Точка замерзания (при поставке)	<-35	° С

Нетоксичный антифриз

Описание	Пределы	Шт.
Внешний вид	Прозрачная бесцветная жидкость
Соответствует ASTM D3306 тип II, ASTM D 4985, SAE J 1034, BS 6580 (1992), AFNOR NF R15-601
С.Г. @ 15 ° C (ASTM D 4052)	1,030 — 1,065	г / мл
Равновесная температура кипения с обратным холодильником, ° C (ASTM D 1120)	> 152	° С
pH (50% об.)	7,5 — 9,5
Температура замерзания, разбавление водой на 50% об.	-34	° С
Температура замерзания 33% -ное разбавление водой	-15	° С

Паспорт безопасности антифриза (MSDS)

Паспорта безопасности антифризов перечисляют соединения, которые считаются серьезными опасностями при использовании в соответствии с рекомендациями, включая силикат натрия, борат натрия и бензоат денатония.

Паспорта безопасности антифризов приведены ниже. В этих паспортах безопасности перечислены потенциальные опасности (включая опасность для здоровья, пожар, реактивность и опасность для окружающей среды) антифриза, а также способы безопасного использования или работы с ним.

И, наконец… Производство антифриза, чтобы оставаться теплым

Невероятно, но в 2014 году ученые объявили, что они обнаружили пять семейств обитающих в Антарктике рыб, которые естественным образом вырабатывают «антифризные» белки, позволяющие им выжить в холодном Южном океане.Эта способность делает их настолько успешными, что эти рыбы составляют более 90% всей биомассы рыб в этом районе.

Хотя мы не можем обеспечить тепло в Антарктике, мы поставляем широкий ассортимент готовых к использованию антифризов и антифризов по индивидуальному заказу, включая нетоксичные варианты.

Состав и применение антифризов антарктических бактерий | Microbial Cell Factories

Wilkins D, Yau S, Williams TJ, Allen MA, Brown MV, DeMaere MZ, Lauro FM, Cavicchioli R.Основные микробиологические факторы в водной среде Антарктики. FEMS Microbiol Rev.2013; 37: 303–35.

CAS Статья Google ученый

Д’Амико С., Коллинз Т., Маркс Дж. К., Феллер Г., Гердей К. Психрофильные микроорганизмы: вызовы для жизни. EMBO Rep. 2006; 7: 385–9.

Артикул Google ученый

Де Маайер П., Андерсон Д., Кэри С., Коуэн Д.А. Некоторым нравится холодность: понимание стратегий выживания психрофилов.EMBO Rep. 2014; 15: 508–17.

Артикул Google ученый

Деврис А., Вольшль Д. Морозостойкость некоторых антарктических рыб. Наука. 1969; 163: 1073–5.

CAS Статья Google ученый

Думан Дж., Деврис А. Морозостойкость камбалы зимой Pseudopleuronectes americanus . Природа. 1974; 247: 237–8.

CAS Статья Google ученый

Раймонд Дж., Деврис А. Ингибирование адсорбции как механизм сопротивления замораживанию у полярных рыб. PNAS. 1977; 74: 2589–93.

CAS Статья Google ученый

Хосино Т., Кириаки М., Охия С., Фудзивара М., Кондо Х., Нисимия Ю., Юмото И., Цуда С. Антифризные протеины из грибов снежной плесени. Может J Bot. 2003. 81: 1175–81.

CAS Статья Google ученый

Janech M, Krell A, Mock T, Kang J, Raymond JA. Связывающие лед белки из морских ледяных диатомовых водорослей (Bacillariophyceae). J Phycol. 2006; 42: 410–6.

CAS Статья Google ученый

Раймонд Дж. Связывающие лед белки снежной водоросли, Chloromonas brevispina : вероятное приобретение путем горизонтального переноса генов. Экстремофилы. 2014; 18 (987): 994.

Google ученый

10.

Гарнхэм С., Гилберт Дж., Хартман С., Кэмпбелл Р., Лейборн-Парри Дж., Дэвис П. А Са ²⁺ -зависимый домен бактериального антифриза имеет новую бета-спиральную складку связывания со льдом. Биохим Дж. 2008; 411 (171): 180.

Google ученый

11.

Гилберт Дж., Хилл П., Додд С., Лейборн-Парри Дж. Демонстрация активности антифриза в бактериях антарктических озер. Микробиология. 2004; 150: 171–80.

CAS Статья Google ученый

12.

Раймонд Дж., Фритсен К., Шен К. Связывающий лед белок из антарктической ледяной бактерии. FEMS Microbiol Ecol. 2007. 61: 214–21.

CAS Статья Google ученый

13.

Уилсон С., Келли Д., Уокер В. Ледоактивные характеристики почвенных бактерий, отобранных по сродству со льдом. Environ Microbiol. 2006; 8: 816–24.

Артикул Google ученый

14.

Челик Ю., Грэм Л.А., Мок Ю.Ф., Бар М., Дэвис П.Л., Браславский И.Перегрев кристаллов льда в растворах антифризов. PNAS. 2010; 107: 5423–8.

CAS Статья Google ученый

15.

Kristiansen E, Zachariassen KE. Механизм, с помощью которого белки-антифризы рыбы вызывают тепловой гистерезис. Криобиология. 2005; 51: 262–80.

CAS Статья Google ученый

16.

ДеВриес А. Гликопротеины как биологические антифризы у антарктических рыб.Наука. 1971; 72: 1152–5.

Артикул Google ученый

17.

Грейтер С.П., Койпер М.Дж., Ганье С.М., Уолкер В.К., Цзя З., Сайкс Б.Д., Дэвис П.Л. Структура β-спирали и свойства связывания льда гиперактивного антифриза насекомого. Природа. 2000. 406: 325–8.

CAS Статья Google ученый

18.

Кристнер, Британская Колумбия. Биоразведка микробных продуктов, влияющих на образование и рост кристаллов льда.Appl Microbiol Biotechnol. 2010; 85: 481–9.

CAS Статья Google ученый

19.

Jeon SM, Naing AH, Park KI, Kim CK. Влияние протеина-антифриза на криоконсервацию хризантем . Культ органа растительной клетки и ткани. 2015. DOI: 10.1007 / s11240-015-0852-х.

Google ученый

20.

Zhou H, Infante-Ferreira CA. Влияние антифризовых белков (AFP) типа III на образование гидратной суспензии CO ₂.Международная конференция по охлаждению и кондиционированию воздуха. 2014. http://docs.lib.purdue.edu/iracc/1473/. По состоянию на 22 декабря 2014 г.

21.

Гриффит М., Эварт К. Белки-антифризы и их потенциальное использование в замороженных пищевых продуктах. Biotechnol Adv. 1995; 13: 375–402.

CAS Статья Google ученый

22.

Уилсон С., Гроган П., Уокер В. Поиск ледяной ассоциации: характеристика отобранных в условиях замораживания – оттаивания накопительных культур из удаленных по широте почв.Может J Microbiol. 2012; 58: 402–12.

CAS Статья Google ученый

23.

МакКорд Дж. М., Кил Б. Б. Младший, Фридович И. Теория облигатного анаэробиоза, основанная на ферментах: физиологическая роль супероксиддисмутазы. PNAS. 1971; 68: 1024-7.

CAS Статья Google ученый

24.

Франк Дж. А., Райх К. И., Шарма С., Вайсбаум Дж. С., Уилсон Б. А., Олсен Дж. Дж. Критическая оценка двух праймеров, обычно используемых для амплификации бактериальных генов 16S рРНК.Appl Environ Microbiol. 2008; 74: 2461–70.

CAS Статья Google ученый

25.

Корреа-Ллантен Д., Аменабар М., Муньос П., Монсалвес М., Кастро М., Блейми Дж. Alicyclobacillus sp. штамм CC2, термоацидофильная бактерия, выделенная с острова Десепшн (Антарктида), обладающая важной супероксиддисмутазной активностью. APS. 2014; 25: 92–6.

Google ученый

26.

Браславский И., Дрори Р. Новый нанолитровый осмометр, управляемый LabVIEW, для исследования белков, связывающих лед. J Vis Exp. 2013; 4: e4189.

Google ученый

27.

Bradford M. Быстрый и чувствительный метод количественного определения количества белка в микрограммах, использующий принцип белка. Анальная биохимия. 1976; 72: 248–54.

CAS Статья Google ученый

28.

Gonzalez ME, Jernstedt JA, Slaughter DC, Barrer DM. Количественная оценка целостности клеток в сырых и обработанных клетках паренхимы лука под микроскопом. J Food Sci. 2010; 75: E402–8.

CAS Статья Google ученый

29.

Зербино ДР. Использование ассемблера velvet de novo для технологий короткого чтения. Curr Protoc Bioinform. 2010. DOI: 10.1002 / 0471250953.bi1105s31.

Google ученый

30.

Aziz RK, Bartels D, Best AA, DeJongh M, Disz T, Edwards RA, Formsma K, Gerdes S, Glass EM, Kubal M, Meyer F, Olsen GJ, Olson R, Osterman AL, Overbeek RA, McNeil LK, Paarmann D, Paczian T, Parrello B, Pusch GD, Reich C, Stevens R, Vassieva O, Vonstein V, Wilke A, Zagnitko O. Сервер RAST: быстрое аннотирование с использованием технологии подсистем. BMC Genom. 2008; 9: 75–89.

Артикул Google ученый

31.

Hyatt D, Chen GL, Locascio PF, Land ML, Larimer FW, Hauser LJ.Блудный: узнавание прокариотических генов и идентификация сайта инициации трансляции. BMC Bioinform. 2010; 11: 119–29.

Артикул Google ученый

32.

Альтшул С.Ф., Гиш В., Миллер В., Майерс Е.В., Липман Д. Базовый инструмент поиска локального выравнивания. J Mol Biol. 1990; 215: 403–10.

CAS Статья Google ученый

33.

Marchler-Bauer A, Derbyshire MK, Gonzales NR, Lu S, Chitsaz F, Geer LY, Geer RC, He J, Gwadz M, Hurwitz D.I, Lanczycki CJ, Lu F, Marchler GH, Song JS, Thanki N, Wang Z, Yamashita RA, Zhang D, Zheng C, Bryant SH.CDD: база данных сохраненных доменов NCBI. Nucleic Acids Res. 2015; 43: D222–6.

CAS Статья Google ученый

34.

Notredame C, Хиггинс Д.Г., Херинга Дж. T-Coffee: новый метод множественного выравнивания последовательностей. J Mol Biol. 2000. 302: 205–17.

CAS Статья Google ученый

35.

Пей Дж., Ким Б.Х., Гришин Н.В. PROMALS3D: инструмент для множественного выравнивания последовательностей и структур.Nucleic Acids Res. 2008; 36: 2295–300.

CAS Статья Google ученый

36.

Biasini M, Bienert S, Waterhouse A, Arnold K, Studer G, Schmidt T, Kiefer F, Gallo Cassarino T, Bertoni M, Bordoli L, Schwede T. Швейцарская модель: моделирование третичной и четвертичной структуры белка. используя эволюционную информацию. Nucleic Acids Res. 2014; 42: W252–8.

CAS Статья Google ученый

37.

Филлипс Дж. К., Браун Р., Ван В., Гамбарт Дж., Тайхоршид Е., Вилла Е., Чипот С., Скил Р. Д., Кале Л., Шультен К. Масштабируемая молекулярная динамика с помощью NAMD. J. Comput Chem. 2005; 26: 1781–802.

CAS Статья Google ученый

38.

Ловелл С.К., Дэвис И.В., Арендалл В.Б., де Баккер ПИВ, Уорд Дж. М., Присант М.Г., Ричардсон Дж. С., Ричардсон, округ Колумбия. Подтверждение структуры по геометрии Cα: отклонение ϕ, ψ и Cβ. Белки. 2003. 50: 437–50.

CAS Статья Google ученый

39.

Койпер М.Дж., Мортон С.Дж., Абрахам С.Е., Грэй-Уил А. Биологическая функция антифриза из насекомых, моделируемая с помощью молекулярной динамики. Элиф. 2015; 4: e05142.

Артикул Google ученый

40.

Моррис Г.М., Рут Х., Линдстрем В., Саннер М.Ф., Белью Р.К., Гудселл Д.С., Олсон А.Дж.. Новости и обновления программного обеспечения AutoDock4 и AutoDockTools4: автоматическая стыковка с гибкостью выборочного рецептора. J. Comput Chem. 2009. 30: 2785–91.

CAS Статья Google ученый

41.

Тротт О., Олсон А.Дж. AutoDock Vina: повышение скорости и точности стыковки за счет новой функции подсчета очков, эффективной оптимизации и многопоточности. J. Comput Chem. 2010. 31: 455–61.

CAS Google ученый

42.

MacKerel AD Jr, Brooks CL III, Nilsson L, Roux B, Won Y, Karplus M. CHARMM: функция энергии и ее параметризация с обзором программы. Энцикл Comput Chem. 1998; 1: 271–7.

Google ученый

43.

Мартина Г., Тобиас Д., Кляйн М. Алгоритмы молекулярной динамики постоянного давления. J Chem Phys. 1994; 101: 4177–89.

CAS Статья Google ученый

44.

Миямото С., Коллман П.А. Settle: аналитическая версия алгоритма SHAKE and RATTLE для моделей жесткой воды. J. Comput Chem. 1992; 13: 952–62.

CAS Статья Google ученый

45.

Andersen HC.Rattle: «скоростная» версия алгоритма встряхивания для расчетов молекулярной динамики. J. Comput Phys. 1983; 52: 24–34.

CAS Статья Google ученый

46.

Дарден Т., Йорк Д., Педерсен Л. Сетка частиц Эвальда: метод N · log (N) для сумм Эвальда в больших системах. J Chem Phys. 1993; 98: 10089–92.

CAS Статья Google ученый

47.

Сопер АК.Функции радиального распределения воды и льда от 220 до 673 К и при давлениях до 400 МПа. Chem Phys. 2000. 258: 121–37.

CAS Статья Google ученый

48.

Ян К., Шарп К.А. Механизм действия антифриза типа III: компьютерное исследование. Biophys Chem. 2004; 109: 137–48.

CAS Статья Google ученый

49.

Залис С, Бар Долев М, Браславский И.Подавление перекристаллизации льда белками антифриза. Криобиология. 2013. DOI: 10.1016 / j.cryobiol.2013.09.147.

Google ученый

50.

Захариассен К.Э., Лундхейм Р. Применение протеинов-антифризов. В: Маргесин Р., Шиннер Ф, редакторы. Биотехнологические применения адаптированных к холоду организмов. 1-е изд. Берлин: Springer; 1998. с. 319–32.

Google ученый

51.

Дэвис П.Л., Баардснес Дж., Койпер М.Дж., Уолкер В.К. Структура и функция антифризов. Филос Транс Соц Лондон Б. 2002; 357: 927–35.

CAS Статья Google ученый

52.

Бар Долев М, Браславский I, Дэвис пл. Белки, связывающие лед, и их функции. Анну Рев Биохим. 2016; 85: 23.1–23.28.

Артикул Google ученый

53.

Дейли М.Э., Спайракопулос Л., Джиа З., Дэвис П.Л., Сайкс Б.Д.Структура и динамика β-спирального антифриза. Биохимия. 2002; 41: 5515–25.

CAS Статья Google ученый

54.

Лейнала Е.К., Дэвис П.Л., Цзя З. Кристаллическая структура β-спирального антифриза указывает на общую модель связывания со льдом. Состав. 2002; 10: 619–27.

CAS Статья Google ученый

Белки-антифризы и их практическое применение в промышленности, медицине и сельском хозяйстве

Антиинфекционные (антивирулентные) свойства AFP

Бактериальные биопленки представляют собой серьезную проблему в клинической медицине, и, по оценкам, более 400000 ежегодно связаны с катетером. инфекции кровотока в U.С. в одиночку. Современные методы лечения не могут избавить от большинства этих инфекций, связанных с катетером. Таким образом, лечение ограничивается удалением и заменой устройства, что еще больше увеличивает риск повторного инфицирования и затраты на лечение. Здесь описан новый класс противоинфекционных средств, эффективных против инфекционных агентов, таких как бактерии, вирусы, грибы и простейшие [74].

Противоинфекционные агенты включают белки-антифризы и пептиды различных организмов в дополнение к синтетическим белкам и пептидам, аминокислотные составы которых получены из белков-антифризов, таких как белок-антифриз членистоногих.Тем не менее гликопротеин-антифриз и гликопептиды клеща Ixodes scapularis также могут вносить вклад в противоинфекционную активность [75]. Они полезны против бактерий, вирусов, грибков и простейших в организме и на коже, уменьшая инфекцию, предотвращая ее возникновение, уменьшая степень ее возникновения или лечя существующую инфекцию. Антифризный гликопротеин Ixodes scapularis (IAFGP) связывается с бактериями, изменяя процесс создания микробной биопленки in vitro ().IAFGP может связываться с Serratia marcescens (SM), Escherichia coli (EC), Pseudomonas entomophila (PE), Staphylococcus aureus (SA) и Listeria monocytogenes (LM) [76,77].

Функции антифриза гликопротеина Ixodes scapularis (IAFGP) как антивирулентного элемента против различных микробов, таких как устойчивый к метициллину Staphylococcus aureus (MRSA) [75].

Криомедицина (криоконсервация / криохирургия)

В основном криомедицина связана с криохирургией и различными криоконсервациями.Криоконсервация — необходимый этап в различных областях биомедицины, таких как генная терапия, тканевая инженерия и скрининг препаратов для сохранения тканей. Для достижения этих аспектов недавно были расширены новые платформы и реагенты с антифризом, а также совместимые осмозащитные свойства для криоконсервации [11].

Криоконсервация клеток и тканей

Обычно деструктивное образование льда и перекристаллизация происходят как снаружи, так и внутри клеток при замораживании.Эти проблемы может решить двухэтапная методика замораживания, когда клетки первоначально охлаждаются до 0 ° C в консервационной жидкости. На первом этапе замораживается только материал, окружающий клетку, где происходит обезвоживание. На втором этапе клетки полностью замораживают жидким азотом (−196 ° C). Предыдущая дегидратация снижает образование кристаллов льда между клетками в этой фазе [78].

Обычно в этой технике используется программируемая морозильная камера, где весь процесс занимает около 2–3 часов.Витрификация — это еще одна процедура, при которой клетки быстро замораживают до -196 ° C с помощью сильно концентрированных (1-3 М) криопротекторов (например, диметилсульфоксида (ДМСО), ацетамида, пропиленгликоля), которые проникают в клетки [79]. Этот метод может препятствовать образованию кристаллов льда как снаружи, так и внутри этих ячеек. Эти криопротекторы полностью токсичны в жидкой фазе. Следовательно, клетки необходимо быстро заморозить, чтобы прекратить гибель клеток перед замораживанием после смешивания детергентов / растворителей. Более того, клетки повреждаются во время процедуры оттаивания как из-за токсичности моющего средства, так и из-за факторов перекристаллизации льда.

Моющие средства, применяемые при двухступенчатом замораживании, также токсичны, однако они намного более разбавлены по сравнению с теми, которые используются при стекловании. У устойчивых к холоду организмов функция AFP сочетается с различными органическими и неорганическими материалами, включая глицерин, глюкозу, ионы, липиды, минеральные соли, пептиды и углеводы. Следовательно, использование оптимальных комбинаций этих веществ может привести к максимальной эффективности АФП, различающейся в зависимости от применения [80,81].

AFP особенно эффективны в замороженных растворах для предотвращения перекристаллизации льда. Первоначально, в 1969 году, в исследовании упоминались и подчеркивались важнейшие функции белков у устойчивых к замораживанию организмов. Исследование красных кровяных телец (эритроцитов) in vitro продемонстрировало влияние AFP на восстановление криоконсервированных клеток [82], которые могут регулярно переносить прохладные условия и, следовательно, быть повреждены ростом кристаллов льда при нагревании. Выживаемость эритроцитов, криоконсервированных в растворе гидроксиэтилкрахмала, может быть увеличена за счет умеренно низких концентраций АФП озимой камбалы ( Pseudopleuronectes americanus ).Сравнительно высокие концентрации этих белков, кроме того, предотвращают перекристаллизацию внеклеточного льда для эритроцитов [83]. Ранее один контролируемый тест показал повреждающее состояние опухолевых клеток в отношении их воздействия AFP [84].

Исследования показали, что травма, полученная на разных этапах процесса криоконсервации, может привести к истощению фолликулов. Следовательно, сохранение в условиях ниже нуля поможет сохранить функцию яичников. Результаты показали криозащитное воздействие белков-антифризов, особенно высокой концентрации LeIBP (AFP), на ткань яичников во время процедуры нагревания / витрификации.Результаты послужили основой для дальнейших исследований механизмов и воздействия AFP на ткани яичников человека [78,85].

Более того, другие исследования показали, что AFGP8 также оказывает положительное влияние на ооциты крупного рогатого скота в отношении травм от переохлаждения во время процесса витрификации [86]. AFP типа III имел полезные эффекты при трансплантации ооцитов и яичников [87,88,89], однако он был менее эффективен в предотвращении крио-травм ооцитов крупного рогатого скота [90].

В начале двадцатого века морские AFP первоначально использовались для защиты клеточных мембран оолеммы при гипотермических температурах через AFGP из антарктических и арктических рыб.Хотя большинство исследований криоконсервации с использованием AFP подтвердили, что добавление AFP может повысить жизнеспособность сперматозоидов при замораживании и оттаивании, многочисленные отчеты не показали положительного эффекта, несмотря на метод замораживания, температуру хранения и биологический образец [91]. AFP использовались при криоконсервации клеточных линий в качестве добавок к обычной замораживающей среде для уменьшения большого количества цитотоксических криопротекторов (CPA) и уменьшения потерь при замораживании. Сперматозоиды были одним из типов клеток, в которых использовался этот метод, и AFP были исследованы на предмет их криоконсервации [92].

AFP рыб были исследованы ранее на предмет их эффективности при добавлении в среду для сохранения спермы для различных организмов на этапах замораживания и охлаждения. У барана, крупного рогатого скота, шимпанзе, буйволов и рыб качество спермы было улучшено с помощью криоконсервации и хранения в холодильнике с помощью AFP [91]. В другом исследовании также сообщалось о наличии АФП-типа I, оказывающего положительное влияние на высокую фертильность бычьей спермы в процессе замораживания-оттаивания. В двух других исследованиях подвижность и целостность плазматической мембраны в сперме буйволов (Nili-Ravi) были улучшены при воздействии AFP типа III и AFGP в процессе замораживания-оттаивания [93,94].АФП типа III также может оказывать благотворное влияние на сперму шимпанзе. По сравнению с АФП типа I и III, тип III лучше функционировал во время криоконсервации спермы карпа Cyprinus carpio [95].

Было продемонстрировано, что АФП типа I и III обладают криопротекторным действием на эмбриональные ткани у рыбок данио [96], а также на ткани печени и сердца у крыс [97,98]. Амир и др. [97] успешно провели криоконсервацию тканей сердца в брюшной полости крысы через 24 ч [99].Кроме того, AFP типа I можно использовать в качестве адъюванта для криохирургии опухолей простаты и печени крыс, оказывая важное воздействие на эти ткани [100].

Трансплантация органов

Криопротекторы (CPA) — это химические вещества, которые предотвращают образование кристаллов льда при нулевых и отрицательных температурах при трансплантации органов. Современные CPA состоят из небольших молекул (часто называемых проникающими CPA), AFP и синтетических полимеров [76]. В настоящее время трансплантация органов является существенным средством лечения органной недостаточности высокого уровня, которая полностью зависит от жизненной ситуации, эффективности и выживаемости.Потеря тканей в органах произошла из-за неадекватности материалов для надлежащего ухода [65].

При обслуживании органов требуются соответствующие растворы и материалы для стабилизации органов и удаления крови. В настоящее время в качестве CPA используются различные компоненты, включая этиленгликоль, 1,2-пропандиол, ДМСО, формамид, глицерин, лактозу, сахарозу и D-маннит. Эти компоненты вызывают интенсивную гибель клеток из-за их высокой токсичности для органов. Поэтому перед трансплантацией необходимо массовое удаление ЦПД при нагревании [76].

AFP и некоторые синтетические полимеры представляют собой специальные CPA, предотвращающие образование кристаллов льда при низких температурах. Несмотря на то, что АФП, полученные естественным путем из рыб, насекомых и растений, играют важную роль в предотвращении образования кристаллов льда, низкая чистота и высокая стоимость этих белков являются основными недостатками. Более того, использование AFP для сохранения тканей органов может обладать иммуногенностью для индукции иммунных ответов [101].

Краткий обзор применения белков-антифризов в криоконсервации и метаболической генной инженерии

3 Biotech.2019 сен; 9 (9): 329.

Аунг Хтай Наинг

Кафедра садоводческих наук, Колледж сельского хозяйства и наук о жизни, Национальный университет Кёнпук, Тэгу, 41566 Корея

Чанг Кил Ким

Департамент Садоводство, Колледж сельского хозяйства и наук о жизни, Национальный университет Кёнпук, Тэгу, 41566 Корея

Факультет садоводства, Колледж сельского хозяйства и наук о жизни, Национальный университет Кёнпук, Тэгу, 41566 Корея

Автор, отвечающий за переписку.

Поступило 16.05.2019 г .; Принято 5 августа 2019 г.

Abstract

Антифризы (AFP) придают способность выживать при отрицательных температурах и обнаруживаются во многих различных организмах, включая рыб, растения и насекомых. Они предотвращают образование кристаллов льда за счет неколлигативной адсорбции на поверхности льда и необходимы для выживания организмов в холодных условиях.Эти белки также широко используются для криоконсервации, пищевых технологий и метаболической генной инженерии в различных источниках и типах клеток-реципиентов. В этом обзоре суммируются успешные применения AFP в криоконсервации животных, насекомых и растений, а также обсуждаются проблемы, возникающие при криоконсервации. Также описаны применения в метаболической генной инженерии, в частности, со сверхэкспрессией генов AFP, полученных от различных организмов, для обеспечения защиты от замерзания чувствительных культур, сезонно подверженных отрицательным температурам.Этот обзор предоставит информацию о потенциальных применениях AFP в криоконсервации животных и растений, а также в метаболической генной инженерии растений в надежде на дальнейшее развитие устойчивых к холоду организмов.

Ключевые слова: Белки-антифризы, устойчивые к холоду организмы, криоконсервация, кристаллы льда, метаболическая генная инженерия

Введение

Белки-антифризы и открытие холодная среда.Эти белки связываются со льдом таким образом, что препятствует росту кристаллов льда, позволяя организмам выжить в этих суровых условиях. Scholander et al. (1957) впервые обнаружили антифризы во время исследования того, почему арктические рыбы могут выжить в воде, температура которой ниже точки замерзания их крови. Точно так же ДеВриз и Вольшлаг (1969) выделили антифризный белок во время исследования антарктических рыб. Присутствие AFP у насекомых было обнаружено Husby и Zachariassen (1980), а их наличие у растений, грибов и бактерий было обнаружено Griffith et al.(1992) и Думан и Олсен (1993). Названия AFP варьируются от белков-антифризов до белков, структурирующих или связывающих лед, или белков теплового гистерезиса. Для целей данного обзора все такие белки будем называть AFP.

Источник белков-антифризов

Белки-антифризы были впервые обнаружены у арктических рыб (Scholander et al. 1957), а затем были сгруппированы в типы I, II, III и IV на основе их последовательностей и структур (рис.). Все эти белки обладают общей способностью изменять точку замерзания растворов.Думан и Олсен (1993) впервые обнаружили AFP в таких микроорганизмах, как бактерии и грибы, а затем последовали открытия других AFP в бактериях и грибах (Gilbert et al.2005; Hoshino et al.2003; Kawahara et al.2007; Muryoi et al. 2004; Ньюстед и др. 1994; Сингх и др. 2014). Аналогичным образом, растительные AFP наблюдались у 60 видов растений, и среди них 11 из этих белков были очищены и охарактеризованы (Gupta and Deswal 2014). АФП, наблюдаемые в растениях, таких как озимая рожь (Griffith et al. 1997), морковь (Meyer et al.1999; Zhang et al. 2004), трава (Sidebottom et al. 2000), озимые злаки (Yeh et al. 2000), персик (Wisniewski et al. 1999) и японский редис (Kawahara et al. 2009) демонстрируют высокую гомологию последовательностей.

Структурные различия между типами AFP рыб (I, II, III и IV)

AFP были также обнаружены у насекомых, таких как молочнокислые клопы (Patterson et al., 1981), бабочки-почкосы (Hew et al., 1983) , снежные скорпионы (Husby, Zachariassen, 1980), веснянки (Gehrken, Somme, 1987), жук Dendroides canadensis (Wu et al.1991), аляскинских насекомых и пауков (Думан и др. 2004) и лесных тараканов (Думан 1979). АФП позволяют этим насекомым выжить при отрицательных зимних температурах за счет снижения точки замерзания жидкостей их организма и предотвращения перекристаллизации.

Белки-антифризы были выделены из многих различных органов, таких как печень, желудок, сердце, семена, стебли, кора, листья и цветы (обзор Cheung et al., 2017). Хотя их структуры и аминокислотные последовательности различаются, все они связываются с разными гранями ледяного кристалла (Jia and Davies 2002).

Механизм действия и роль белков-антифризов

AFP позволяют организмам выживать в суровых условиях окружающей среды, понижая температуру замерзания воды за счет связывания с ядрами льда и ингибирования перекристаллизации (рис.,). Недавно Лю и др. (2018) обнаружили, что АФП из гриба Pichia pastoris снижают температуру замерзания, контролируют размер кристаллов льда и уменьшают ущерб от замораживания гидратированной глютена. Сообщалось также о подобной активности растительных AFP в защите растительных клеток от повреждения замораживанием.Было показано, что АФП из зимостойких хвойных пород ингибируют образование кристаллов льда (Jarzabek et al. 2009). Способность AFP насекомых снижать точки замерзания раствора также хорошо задокументирована (Думан и Серианни 2002; Думан 2002; Олсен и Думан 1997; Грэхэм и др. 1997; Томчак и др. 2003). Интересно, что структуры AFP у этих организмов, таких как океанический пух, зимняя камбала, жук, моль и снежная блоха, отличаются друг от друга (рис., PDB 101).

Связывание белков антифриза (AFP) с ядром льда для предотвращения образования крупных кристаллов льда

Сравнение статуса перекристаллизации льда в растворах с (+) или без (-) AFP при -6 ° C в течение 60 мин

Сводка структурных различий между белками-антифризами в разных таксонах (PDB 101)

Классификация белков-антифризов на основе активности

AFP могут быть классифицированы как умеренно активные или гиперактивные в зависимости от их положения связывания со льдом.Умеренно активные AFP связываются с призматической и пирамидальной плоскостями ледяного кристалла и образуют гексагональную бипирамидальную форму ледяного кристалла, тогда как гиперактивные AFP связываются с этими плоскостями и базальной плоскостью ледяного кристалла (рис.), В результате чего получается круглая дискообразная форма. морфология ледяных кристаллов (Knight et al. 1991; Drori et al. 2014; Park et al. 2012). Связывание гиперактивных AFP с базальной плоскостью может привести к большему ингибирующему эффекту на рост льда со всей поверхности льда, чем у умеренно активных AFP, с гораздо более высокой активностью термического гистерезиса (TH), чем у их умеренно активных аналогов (Kong et al. .2016; Pertaya et al. 2008; Drori et al. 2014).

Различные участки связывания кристаллов льда для гиперактивных и умеренно активных белков-антифризов

Классификация белков-антифризов на основе значений TH

Изменение точек плавления и замерзания, обусловленное AFP, известно как термический гистерезис (TH). AFP также можно классифицировать на основе значений TH, чтобы указать их уровень антифриза. АФП с высокими значениями TH, такие как AFP насекомых (значения TH 5-10 ° C), считаются гиперактивными (Lin et al.2010), тогда как продукты из растений и рыб (значения TH 0,2-0,6 ° C и 1-2 ° C) классифицируются как умеренно активные (Sicheri and Yang 1995; Griffith and Yaish 2004). Однако гиперактивные AFP не обязательно обеспечивают лучшую криоконсервацию, чем умеренно активные белки; например, было показано, что умеренно активные AFP защищают ткань яичников мыши в десять раз более эффективно, чем гиперактивные белки (Kim et al. 2015; Lee et al. 2015a, b).

Применение протеинов-антифризов

Снижение точек замерзания AFP не является коллигативным и существенно не меняет точки плавления независимо от концентрации (Raymond et al.2007; Ли и др. 2010; Tomczak et al. 2003 г.). Об эффективном ингибировании перекристаллизации льда низкими концентрациями AFP сообщалось в предыдущих исследованиях (Knight et al. 1984, 1988), и оно отличается от обычных антифризов, таких как метанол, глицерин или этиленгликоль, которые понижают точки замерзания пропорционально их концентрациям. АФП очень востребованы для использования в криоконсервации, биотехнологии и пищевой промышленности (Christner 2010) из-за их уникальных способностей. Было показано, что добавление AFP к клеткам, органам и тканям растений и животных улучшает эффективность криоконсервации (Jeon et al.2015; Seo et al. 2018). Что касается еды, то AFP улучшают текстуру мороженого (Regand and Goff, 2006) и качество мясных консервов (Griffith and Ewart, 1995). Экспрессия AFP в трансгенных растениях увеличивает рост льда в них (Griffith et al. 1997; Hoshino et al. 1999; Maunsbach et al. 2001; Holmberg et al. 2001). В этом обзоре подробно обсуждается применение различных AFP в биотехнологии растений и животных.

Применение АФП при криоконсервации

Методы криоконсервации клеток, тканей и органов хорошо зарекомендовали себя для растений и животных благодаря использованию таких криопротекторов, как диметилсульфоксид (ДМСО), глицерин и поливинилпирролидон (ПВП).Однако, поскольку мембраны клеток и органов чрезвычайно чувствительны к циклам замораживания и оттаивания, высокие концентрации этих соединений необходимы для обезвоживания цитозоля и минимизации образования внутриклеточных кристаллов льда во время циклов замораживания и оттаивания (Taylor and Fletcher 1998, 1999). Эти высокие концентрации также могут вызывать цитотоксичность, изменяя эпигенетическую регуляцию клеток (Adler et al. 2006; Thaler et al. 2012), и привели к спросу на альтернативные криопротекторы с меньшей токсичностью.Как описано выше, AFP могут подавлять рост льда во время замораживания и оттаивания без значительного влияния на температуру плавления. Кроме того, поскольку эти белки неколлигативно понижают точку замерзания, они считаются менее токсичными, чем существующие криопротекторы. Относительно низкие концентрации AFP могут препятствовать перекристаллизации льда по сравнению с другими криопротекторами. Многие исследователи сосредоточили свое внимание на использовании AFP для криоконсервации клеток, тканей и органов растений и животных из-за их уникальных свойств.Согласно обзору Kim et al. (2017), для криоконсервации чаще всего используются AFP типа III, за ними следуют AFP типа I. АФП типа II редко используются в качестве криопротекторов (рис.).

Использование различных типов AFP в исследованиях криоконсервации

Применение AFP для криоконсервации клеток, тканей и органов животных

Различные типы AFP рыб, особенно типы I и III, использовались для улучшения криоконсервации животных клетки, ткани и органы, такие как ооциты устриц (Найденко, 1997), ооциты крупного рогатого скота и свиньи (Rubinsky et al.1991, 1992), линии клеток позвоночных и беспозвоночных (Koushafar and Rubinsky 1997), интактную печень (Lee et al. 1992; Rubinsky et al. 1994) и сперму быков (Prathalingam et al. 2006). В сперматозоидах, криоконсервированных с AFP, по сравнению с сперматозоидами, не содержащими (Uperti et al. 1996), наблюдались улучшенная подвижность и уменьшенная утечка ферментов. Присутствие AFP также улучшает качество криоконсервированных эмбрионов овцы (Baguisi et al. 1997). Рубинский и др. (1994) сообщили, что сердца, консервированные с AFP, оставались жизнеспособными, как показывает электронная микроскопия, в то время как сердца, консервированные без AFP, не сохранялись.В других исследованиях было показано, что AFP защищают сердце от повреждения замораживанием и улучшают жизнеспособность во время криоконсервации (Amir et al. 2004, 2005; Soltys et al. 2001). Эмбрионы из Sparus aurata , инъецированные AFP, показали улучшенную устойчивость к охлаждению при 0 и –10 ° C с коэффициентом вылупления примерно 100% (Robles et al. 2006). Jo et al. (2011) обнаружили, что добавление рыбьего AFP (500 нг / мл) к раствору для витрификации улучшает выживаемость незрелых ооцитов мышей, в то время как Lee et al.(2015a) сообщили, что разнообразные белки дрожжей, бактерий и рыб улучшают качество ооцитов мышей и их эмбриональное развитие. Zilli et al. (2014) сообщили, что добавление АФП рыб типа III в среду для криоконсервации защищает сперматозоиды от замораживания и повышает их жизнеспособность по сравнению с другими видами лечения (контроль, ДМСО и ДМСО + АФП рыб типа I). Криопротекторный эффект AFP рыб типа III также наблюдался на эмбрионах кроликов (Nishijima et al. 2014). Ideta et al. (2014) сообщили, что эмбрионы крупного рогатого скота, хранящиеся в среде, содержащей 10 мг / мл AFP, выживали в течение 10 дней при 4 ° C.Эмбрионы рыб, инкубированные в растворе, содержащем AFP типа I, демонстрируют значительно повышенную выживаемость при воздействии 4 или 10 ° C (Martínez-Páramo et al. 2008a, b, 2009). АФП типа I блокируют ионные каналы калия и кальция, уменьшая утечку ионов из липидных мембран при 4 ° C (Rubinsky et al. 1992; Baguisi et al. 1997), тем самым помогая поддерживать трансмембранный ионный градиент и улучшая криоконсервацию клеток и тканей ( Арав и др., 1993). Точно так же AFP типа III стабилизируют плазматическую мембрану, взаимодействуя с липидами (Wang and Huang 1996).В отличие от AFP типа I и III, AFP типа II связаны с цитотоксичностью в клетках, тканях и органах во время криоконсервации (Naidenko 1997; Pham et al.1999; Wang et al.1999), и их использование при криоконсервации нечасто (рис. ). Более высокие концентрации AFP могут вызвать образование разрушительного игольчатого льда и привести к снижению выживаемости криоконсервированных клеток после оттаивания (Lee et al. 2015a, b; Hansen et al. 1993; Carpenter and Hansen 1992). Таким образом, в исследованиях криоконсервации предпочтительны низкие концентрации AFP.Однако оптимальная концентрация для криоконсервации различается в зависимости от типа клеток и источника AFP, а использование AFP при криоконсервации требует тонкой настройки в зависимости от этих различных параметров.

Применение AFP для криоконсервации растительных клеток, тканей и органов

Криоконсервация растительных клеток, тканей и органов также была предпринята для долгосрочного сохранения видов (Engelmann 2011; Jeon et al.2015; Seo et al. др. 2018). Однако, поскольку обычно используемые эксплантаты, такие как мозоли или кончики побегов, содержат большое количество клеточной воды, вероятны повреждения от замерзания из-за кристаллизации этой воды в лед во время замораживания и оттаивания, что приводит к низкой выживаемости.Кроме того, как упоминалось выше, обычно используемые криопротекторы, такие как глицерин, сахара и ДМСО, токсичны для некоторых тканей растений. В 1989 году Катлер и др. (1989) исследовали влияние вакуумной инфильтрации АФП в листья растений картофеля ( Solanum tuberosum L.), канолы ( Brassica napus ) и Arabidopsis thaliana (L.) и обнаружили, что АФП снижают вероятность их замораживания. температуры значительно по сравнению с контрольными элементами, пропитанными водой, при этом количество замораживаемой воды уменьшается в диапазоне низких температур.У канолы температура замерзания была снижена в среднем на 1,8 ° C, что указывает на то, что инфильтрация AFP может понизить точку замерзания до уровня, который существенно повысит выживаемость сельскохозяйственных культур в типичных сельскохозяйственных условиях. Wang et al. (2001) далее сообщили, что использование AFP повышает эффективность криоконсервации эмбриогенных клеток риса. Jeon et al. (2015) также отметили, что добавление AFP рыбы типа I к раствору для витрификации значительно повышает эффективность криоконсервации хризантем.Seo et al. (2018) обнаружили, что включение АФП рыб типа III в растворы для криозащиты улучшает эффективность криоконсервации кончиков побегов картофеля. Pe et al. (2019) наблюдали участие AFP в регуляции чувствительных к холоду генов у Hosta capitate в условиях низких температур. Однако в настоящее время АФП реже используются при криоконсервации растений, чем при криоконсервации животных и животных тканей.

Применение AFP в метаболической генной инженерии

Введение генов, кодирующих AFP, с помощью метаболической генной инженерии — еще одна многообещающая стратегия улучшения устойчивости к замораживанию трансгенных растений и животных.Во многих исследованиях предпринимались попытки создания устойчивых к замораживанию растений и животных посредством сверхэкспрессии генов AFP в организмах, в остальном чувствительных к холоду. Успехи в этой области в последнее время существенно возросли.

Получение трансгенных растений, сверхэкспрессирующих АФП рыб, было зарегистрировано для многих видов, включая Arabidopsis , табак, томаты и картофель (Hightower et al. 1991; Kenward et al. 1993; Wallis et al. 1997; Worrall et al. . 1998). Перекристаллизация льда была успешно ингибирована в экстрактах трансгенных листьев томатов, сверхэкспрессирующих AFP рыб (Hightower et al.1991) и Balamurugan et al. (2018) утверждали, что сверхэкспрессия гена AFP из травы ржи ( Lolium perenne ) в растениях томатов привела к значительно более высокой морозостойкости, чем у растений дикого типа, за счет трехкратного увеличения относительного содержания воды и снижения в 2,6 раза. в индексе утечки электролита. Wallis et al. (1997) наблюдали, что трансгенный картофель, сверхэкспрессирующий генов AFP , демонстрировал значительно меньшую утечку электролитов, чем контрольные растения после замораживания при -2 ° C.Сверхэкспрессия насекомого AFP в Arabidopsis привела к значительной антифризной активности и повышенной морозостойкости (Meyer et al. 1999), а трансгенные растения Arabidopsis со сверхэкспрессией насекомого AFP показали повышенную устойчивость к холоду за счет снижения температуры их замораживания. (Хуанг и др., 2002). Lin et al. (2011) подтвердили, что интеграция насекомого AFP в трансгенный Arabidopsis снизила его температуру замерзания на 2-3 ° C по сравнению с растениями дикого типа.Аналогичным образом, улучшенная устойчивость к замораживанию наблюдалась у трансгенного Arabidopsis , сверхэкспрессирующего AFP насекомого из червя почек ели; трансгенные линии имели меньшую утечку ионов и малоновый диальдегид, чем линии дикого типа при температурах до -20 ° C в течение 30 минут и 4 ° C в течение ночи (Zhu et al. 2010). Точно так же введение насекомых AFP и рыб типа I AFP в табак ингибирует перекристаллизацию льда (Holmberg et al. 2001; Kenward et al. 1993) в этих растениях.Deng et al. (2014) утверждали, что гетерологичная экспрессия AnAFP в табаке приводила к меньшему увяданию и меньшему изменению относительной электропроводности при холодовом стрессе (-3 ° C) по сравнению с растениями дикого типа после 16 часов замораживания и 1 часа оттаивания. Напротив, избыточная экспрессия AFP рыб типа II в табаке не придает устойчивости к холоду (Kenward et al. 1999). Wang et al. (2008) также наблюдали, что трансгенный табак, сверхэкспрессирующий AFP из насекомого Microdera punctipennis , продемонстрировал улучшенную устойчивость к замораживанию по сравнению с растениями дикого типа за счет снижения утечки ионов и уровней малонового диальдегида.Fan et al. (2002) подтвердили, что трансгенная экспрессия гена моркови AFP может повысить устойчивость растений табака к холоду за счет значительно большего снижения утечки ионов (1-30%), чем у дикого типа (1-80%). Трансгенная пшеница, сверхэкспрессирующая AFP , показала значительную устойчивость к замораживанию при -7 ° C с высоким уровнем антифризовой активности (Khanna and Daggard 2006). Однако наиболее эффективные антифризы для разных растений зависят от уровня экспрессии, локализации и стабильности AFP.

Введение АФП рыбы типа I в икру лососевых рыб привело к появлению устойчивых к холоду трансгенных лососевых рыб (Hew et al. 1992). Hew et al. (1999) далее сообщили, что интеграция AFP рыб в лосось привела к унаследованной экспрессии гена AFP в поколении F ₃. Точно так же микроинъекция Ocean pout type III AFP в ооциты золотой рыбки привела к получению трансгенной золотой рыбки с улучшенной устойчивостью к низким температурам (Wang et al.1995), а Хоббс и Флетчер (2008) также передали лососю ген AFP для повышения устойчивости к замораживанию.

Было показано, что сверхэкспрессия AFP рыб типа III улучшает антифризную активность и защищает от повреждения замораживанием во время криоконсервации яичников трансгенных мышей (Bagis et al. 2006, 2008). Улиг и др. (2011) также сообщили, что гетерологичная экспрессия AFP в Escherichia coli дает антифризную активность и вызывает деформацию кристаллов, ингибирование перекристаллизации и TH.Точно так же экспрессия AFP рыб в Drosophila увеличивала антифризную активность, и трансгенные мухи были способны выживать значительно дольше при температурах, близких к отрицательным, чем контрольные, благодаря предотвращению апоптоза (Nicodemus et al. 2006; Neelakanta et al. 2012).

Заключение

AFP из различных таксонов, включая рыб, бактерии, грибы, насекомых и растения, позволяют организмам выживать при отрицательных температурах за счет снижения точки замерзания для роста льда в них.AFP, полученные из разных видов, успешно использовались для криоконсервации клеток и органов растений и животных, хотя их способность снижать температуру замерзания зависит от вида и типа клеток, из которых происходит AFP, типа и концентрации AFP, а также криоконсервации. протокол. Обширные исследования были сосредоточены на разработке трансгенных животных или растений с повышенной экспрессией AFP для улучшения их выживаемости в экстремальных холодных условиях. Однако цитотоксичность некоторых AFP несколько ограничивает их применение при криоконсервации.Таким образом, идентификация новых AFP, лучше подходящих для криоконсервации, будет иметь важные практические последствия. Разработка метода прямой доставки AFP в клетки для контроля роста кристаллов без повреждения клеток также необходима для улучшения применимости AFP в будущих методах криоконсервации.

Перспективы на будущее

Об успешном применении AFP при криоконсервации животных и растений сообщалось в нескольких различных исследованиях.Однако из-за низкого выхода и высокой стоимости будущее применение AFP остается неопределенным. Необходимо увеличить выход продукции с помощью различных молекулярно-биологических методов, а снижение стоимости использования AFP в криоконсервации и пищевой промышленности приведет к увеличению использования в будущем. Было показано, что сверхэкспрессия генов AFP, полученных от различных организмов, обеспечивает защиту от замерзания чувствительным культурам, подвергающимся сезонным отрицательным температурам, и затраты, связанные с трансгенными растениями, быстро снижаются.Мы ожидаем увеличения производства трансгенных растений, экспрессирующих AFP, с помощью метаболической генной инженерии, особенно для улучшения морозостойкости садовых растений и декоративных срезанных цветов, что будет способствовать дальнейшему развитию мировой садоводческой индустрии.

Вклад авторов

AHN собрал литературу и написал рукопись; CKK консультировал и помогал в написании рукописи.

Финансирование

Эта работа была поддержана Корейским институтом планирования и оценки технологий в области продовольствия, сельского хозяйства, лесного хозяйства и рыболовства (IPET) в рамках Программы развития технологий агробиоиндустрии, финансируемой Министерством сельского хозяйства, продовольствия и сельских районов. Дела (MAFRA) (Грант № 315002-5)

Соблюдение этических стандартов

Заявление о конфликте интересов

Авторы сообщают об отсутствии конфликта интересов.

Ссылки

Адлер С., Пеллизер С., Папарелла М., Хартунг Т., Бремер С. Влияние растворителей на дифференцировку эмбриональных стволовых клеток. Toxicol Vitro. 2006. 20: 265–271. [PubMed] [Google Scholar]
Амир Г., Рубинский Б., Горовиц Л., Юсиф Б.С., Леор Дж., Смолинский А.К., Лави Дж. Повышение жизнеспособности и снижение апоптоза при температуре ниже нуля 21 ч консервации трансплантированных сердец крыс с использованием антифризов. J Heart Lung Transpl. 2004. 23: 171–172. [PubMed] [Google Scholar]
Амир Г., Рубинский Б., Башир С.Ю., Горовиц Л., Джонатан Л., Файнберг М.С., Смолинский А.М., Лави Дж.Повышение жизнеспособности и снижение апоптоза при температуре ниже нуля 21 ч консервации трансплантированных сердец крыс с использованием белков-антифризов. J Heart Lung Transpl. 2005; 24: 1915–1929. [PubMed] [Google Scholar]
Арав А., Рубинский Б., Флетчер Г., Серен Э. Криогенная защита ооцитов с помощью белков-антифризов. Mol Reprod Dev. 1993; 36: 488–493. [PubMed] [Google Scholar]
Bagis H, Aktoprakligil D, Mercan HO, Yurdusev N, Turgut G, Sekmen S, Arat S, Cetin S. Стабильная передача и транскрипция гена антифриза рыбы типа III в Ньюфаундленде у трансгенных мышей и гипотермическое хранение трансгенных яичников и семенников.Mol Reprod Dev. 2006. 73: 1404–1411. [PubMed] [Google Scholar]
Багис Х., Аккок Т., ТАСС А, Актопраклигил Д. Криогенный эффект антифриза на яичники трансгенных мышей и производство живого потомства путем ортотопической трансплантации криоконсервированных яичников мыши. Mol Reprod Dev. 2008. 75: 608–613. [PubMed] [Google Scholar]
Багиси А., Арав А., Кросби Т.Ф., Рош Д.Ф., Боланд М.П. Гипотермическое хранение эмбрионов овец с антифризными белками: разработка in vitro и in vivo.Териогенология. 1997; 48: 1017–1024. [PubMed] [Google Scholar]
Balamurugan S, Ann JS, Varghese IP, Murugan SB, Harish MC, Kumar SR, Sathishkumar R. Гетерологичная экспрессия антифриза Lolium perenne придает помидорам устойчивость к холоду. J Integr Agric. 2018; 17: 1128–1136. [Google Scholar]
Carpenter JF, Hansen TN. Белок-антифриз модулирует выживаемость клеток во время криоконсервации: посредничество через влияние на рост кристаллов льда. Proc Natl Acad Sci USA.1992; 89: 8953–8957. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
Cheung RC, Ng TB, Wong JH. Белки-антифризы из различных организмов и их применение: обзор. Curr Protein Pept Sci. 2017; 18: 262–283. [PubMed] [Google Scholar]
Christner B. Биоразведка микробных продуктов, влияющих на образование и рост кристаллов льда. Appl Microbiol Biotechnol. 2010. 85: 481–489. [PubMed] [Google Scholar]
Катлер А.Дж., Салим М., Кендалл Э., Густа Л.В., Жорж Ф., Флетчер Г.Л.Протеин-антифриз камбалы озимой повышает морозоустойчивость тканей растений. J. Plant Physiol. 1989. 135: 351–354. [Google Scholar]
Deng LQ, Yu HQ, Liu YP, Jiao PP, Zhou SF, Zhang SZ, Li WC, Fu FL. Гетерологичная экспрессия гена антифриза AnAFP из Ammopiptanthus nanus усиливает устойчивость к холоду у Escherichia coli и табака. Ген. 2014; 539: 132–140. [PubMed] [Google Scholar]
DeVries AL, Wohlschlag DE. Морозостойкость некоторых антарктических рыб.Наука. 1969; 163: 1073–1075. [PubMed] [Google Scholar]
Дрори Р., Челик Ю., Дэвис П. Л., Браславский И. Белки, связывающие лед, которые накапливаются на разных плоскостях кристаллов льда, создают отчетливую динамику теплового гистерезиса. Интерфейс J R Soc. 2014; 11: 20140526. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
Duman JG. Факторы теплового гистерезиса у зимующих насекомых. J. Insect Physiol. 1979. 25 (10): 805–810. [Google Scholar]
Duman JG. Ингибирование зародышей льда белками-антифризами насекомых усиливается глицерином и цитратом.J. Comp Physiol. 2002. 172: 163–168. [PubMed] [Google Scholar]
Duman JG, Olsen TM. Активность белков теплового гистерезиса у бактерий, грибов и филогенетически разнообразных растений. Криобиология. 1993; 30: 322–328. [Google Scholar]
Думан Дж.Г., Серианни А.С. Роль эндогенных усилителей антифриза в активности теплового гистерезиса гемолимфы у жука Dendroides canadensis . J. Insect Physiol. 2002. 48: 103–111. [PubMed] [Google Scholar]
Думан Дж. Г., Беннет Т., Сформо Т., Хохштрассер Р., Барнс Б.М.Белки-антифризы у насекомых и пауков Аляски. J. Insect Physiol. 2004. 50: 259–266. [PubMed] [Google Scholar]
Энгельманн Ф. Криоконсервация эмбрионов: обзор. В: Торп Т.А., Йунг Э.С., редакторы. В культуре зародышей растений. Методы молекулярной биологии. Нью-Йорк: Humana Press; 2011. С. 155–184. [Google Scholar]
Fan Y, Liu B, Wang H, Wang S, Wang J. Клонирование гена антифриза из моркови и его влияние на устойчивость к холоду трансгенных растений табака. Растительная клетка Rep.2002; 21: 296–301. [Google Scholar]
Gehrken U, Somme L. Повышение морозостойкости яиц Arcynopteryx compacta (Plecoptera) за счет обезвоживания. J. Insect Physiol. 1987. 33 (12): 987–991. [Google Scholar]
Гилберт Дж. А., Дэвис П. Л., Лейборн-Парри Дж. Гиперактивный Ca 2+ -зависимый антифризный белок в антарктических бактериях. FEMS Microbiol Lett. 2005. 245 (1): 67–72. [PubMed] [Google Scholar]
Грэм Л.А., Лиу Ю.С., Уокер В.К., Дэвис П.Л. Гиперактивный протеин-антифриз от жуков.Природа. 1997. 388: 727–728. [PubMed] [Google Scholar]
Гриффит М., Эварт К.В. Белки-антифризы и их возможное использование в замороженных продуктах. Biotechnol Adv. 1995; 13: 375–402. [PubMed] [Google Scholar]
Griffith M, Yaish MW. Белки-антифризы у зимующих растений: рассказ о двух действиях. Trends Plant Sci. 2004. 9: 399–405. [PubMed] [Google Scholar]
Гриффит М., Ала П., Янг Д.С., Хон В.С., Моффатт Б.А. Белок-антифриз вырабатывается эндогенно в листьях озимой ржи. Plant Physiol.1992; 100: 593–596. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
Griffith M, Antikainen M, Hon WC, Pihakaski-Maunsbach K, Yu XM, Chun JU, Yang DSC. Протеины-антифризы озимой ржи. Physiol Plantarum. 1997. 100: 327–332. [Google Scholar]
Gupta R, Deswal R. Антифризные белки позволяют растениям выживать в условиях замораживания. J Biosci. 2014; 39 (5): 931–944. [PubMed] [Google Scholar]
Хансен Т.Н., Смит К.М., Brockbank KG. Белок-антифриз типа I снижает восстановление клеток после криоконсервации.Transpl Proc. 1993; 25: 3182–3184. [PubMed] [Google Scholar]
Hew CL, Kao MH, So Y-P, Lim K-P. Наличие цистеинсодержащих белков-антифризов в черве почек ели, Choristoneura fumiferana . Может J Zool. 1983. 61 (10): 2324–2328. [Google Scholar]
Hew CL, Davies PL, Fletcher G. Перенос гена антифриза у атлантического лосося. Мол Мар Биол Биотехнология. 1992; 1: 309–317. [PubMed] [Google Scholar]
Hew C, Poon R, Xiong F, Gauthier S, Shears M, King M, Davies P, Fletcher G.Специфическая для печени и сезонная экспрессия трансгенного атлантического лосося, несущего ген антифриза зимней камбалы. Transgenic Res. 1999; 8: 405–414. [PubMed] [Google Scholar]
Хайтауэр Р., Баден С., Пензес Е., Лунд П., Дансмюр П. Экспрессия белков антифриза в трансгенных растениях. Завод Мол Биол. 1991; 17: 1013–1021. [PubMed] [Google Scholar]
Хоббс Р.С., Флетчер Г.Л. Тканеспецифическая экспрессия трансгенов антифриза и гормона роста, управляемая промотором гена антифриза OP5a белка океана ( Macrozoarces americanus ) у атлантического лосося ( Salmo salar ) Transgenic Res.2008; 17: 33–45. [PubMed] [Google Scholar]
Holmberg N, Farr´es J, Bailey JE, Kallio PT. Нацеленная экспрессия синтетического гена с оптимизированными кодонами, кодирующего антифризный белок елового почкопухового червя, приводит к накоплению антифризовой активности в апопластах трансгенного табака. Ген. 2001. 275: 115–124. [PubMed] [Google Scholar]
Хосино Т., Одаира М., Йошида М., Цуда С. Физиологическое и биохимическое значение антифризов в растениях. J Plant Res. 1999; 112: 255–261.[Google Scholar]
Хосино Т., Кириаки М., Охия С., Фудзивара М., Кондо Х., Нисимия Й., Юмото И., Цуда С. Антифризные протеины из грибов снежной плесени. Может ли J Bot Rev Can Bot. 2003. 81: 1175–1181. [Google Scholar]
Хуанг Т., Никодемус Дж., Зарка Д.Г., Томашоу М.Ф., Вишневски М., Думан Дж. Экспрессия антифриза насекомого ( Dendroides canadensis ) в Arabidopsis thaliana приводит к снижению температуры замерзания растений. Завод Мол Биол. 2002. 50: 333–344.[PubMed] [Google Scholar]
Husby JA, Zachariassen KE. Антифризы в жидкости организма зимних активных насекомых и пауков. Experientia. 1980. 36 (8): 963–964. [Google Scholar]
Ideta A, Aoyagi Y, Tsuchiya K, Nakamura Y, Hayama K, Shirasawa A, Sakaguchi K, Tominaga N, Nishimiya Y, Tsuda S. Продолжительное хранение бычьих эмбрионов при пониженном давлении (4 ° C) с рыбным антифризом белок. J Reprod Dev. 2014; 61: 1–6. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
Jarzabek M, Pukacki PM, Nuk K.Регулируемые холодом белки с сильным антифризом и криозащитным действием в елях ( Picea spp.) Криобиология. 2009. 58: 268–274. DOI: 10.1016 / j.cryobiol.2009.01.007. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
Jeon SM, Naing AH, Park KI, Kim CK. Влияние протеина антифриза на криоконсервацию хризантем. Культ растительных клеток, тканей, органов. 2015; 123: 665–671. [Google Scholar]
Jia Z, Davies PL. Белки-антифризы: необычное взаимодействие рецептор-лиганд.Trends Biochem Sci. 2002. 27 (2): 101–106. [PubMed] [Google Scholar]
Джо Дж. У., Джи BC, Ли Дж. Р., Су К. С.. Влияние добавок антифриза в среде для витрификации на компетентность развития ооцитов мышей. Fertil Steril. 2011; 96: 1239–1245. [PubMed] [Google Scholar]
Кавахара Х., Иванака Й., Хига С., Мурёи Н., Сато М., Хонда М., Омура Х., Обата Х. Новый внутриклеточный антифризный белок в антарктической бактерии, Flavobacterium xanthum . Cryo Lett. 2007; 28: 39–49.[PubMed] [Google Scholar]
Кавахара Х., Фуджи А., Иноуэ М., Китао С., Фукуока Дж., Обата Х. Антифризная активность акклиматизированного к холоду японского редиса и очистка антифриза пептида. Cryo Lett. 2009. 30: 119–131. [PubMed] [Google Scholar]
Кенвард К.Д., Альтшулер М., Хильдербранд Д., Дэвис П.Л. Накопление рыбьего антифриза типа I в трансгенном табаке при простудных заболеваниях. Завод Мол Биол. 1993; 23: 377–385. [PubMed] [Google Scholar]
Кенвард К.Д., Брэндл Дж., Макферсон Дж., Дэвис П.Л.Накопление рыбьего антифриза типа II в трансгенном табаке не обеспечивает морозостойкости. Transgenic Res. 1999. 8: 105–117. [PubMed] [Google Scholar]
Khanna HK, Daggard GE. Нацеленная экспрессия модифицированного и оптимизированного по кодонам синтетического гена приводит к ингибированию перекристаллизации и уменьшению утечки электролитов в яровой пшенице при отрицательных температурах. Реплика растительных клеток 2006; 25: 1336–1346. [PubMed] [Google Scholar]
Ким Х. Дж., Шим Х. Э., Ли Дж. Х., Кан И. К., Хур Й.Б. Связывающий со льдом белок, полученный из Glaciozyma , может улучшить жизнеспособность криоконсервированных клеток млекопитающих.J Microbiol Biotechnol. 2015; 25: 1989–1996. [PubMed] [Google Scholar]
Ким Х.Дж., Ли Дж.Х., Хур Й.Б., Ли С.В., Пак Ш., Ку Б.В. Белки морских антифризов: структура, функции и применение в криоконсервации в качестве потенциального криопротектора. Mar Drugs. 2017; 15:27. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
Knight CA, DeVries AL, Oolman LD. Рыбный антифриз протеиновый и замораживание и перекристаллизация льда. Природа. 1984. 308: 295–296. [PubMed] [Google Scholar]
Knight CA, Hallett J, DeVries AL.Влияние растворенных веществ на рекристаллизацию льда: метод оценки. Криобиология. 1988; 25: 55–60. [PubMed] [Google Scholar]
Knight CA, Cheng CC, DeVries AL. Адсорбция альфа-спиральных пептидов антифриза на определенных плоскостях поверхности кристаллов льда. Биофиз Дж. 1991; 59: 409–418. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
Kong CH, Hamid N, Liu T., Sarojini V. Влияние предварительной обработки антифризным пептидом на размер кристаллов льда, потери стекания, текстуру и летучие соединения замороженной моркови.J. Agric Food Chem. 2016; 64: 4327–4335. [PubMed] [Google Scholar]
Кушафар Х., Рубинский Б. Влияние антифризовых белков на замороженные первичные клетки аденокарциномы предстательной железы. Урология. 1997; 49: 421–425. [PubMed] [Google Scholar]
Lee CY, Rubinsky B, Fletcher GL. Гипотермическая консервация целых органов млекопитающих протеинами-антифризами. Cryo Lett. 1992; 13: 59–66. [Google Scholar]
Lee JK, Park KS, Park S, Park H, Song YH, Kang SH, Kim HJ. Внеклеточный гликопротеин, связывающийся со льдом, из арктических психрофильных дрожжей.Криобиология. 2010. 60: 222–228. [PubMed] [Google Scholar]
Ли Х. Х., Ли Х. Дж., Ким Х. Дж., Ли Дж. Х., Ко Й, Ким С. М., Ли Дж. Р., Су С. С., Ким Ш. Влияние белков-антифризов на витрификацию ооцитов мышей: сравнение трех различных белков-антифризов. Hum Reprod. 2015; 30: 2110–2119. [PubMed] [Google Scholar]
Ли Дж., Ким С. К., Йом Х. У., Ким Х. Дж., Ли Дж. Р., Су С. С., Ким Ш. Влияние трех различных типов белков-антифризов на криоконсервацию и трансплантацию ткани яичников мыши.PLoS One. 2015; 10: e0126252. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
Lin X, O’Tousa JE, Duman JG. Экспрессия двух самоусиливающихся белков-антифризов жука Dendroides Canadensis в Drosophila melanogaster. J. Insect Physiol. 2010. 56 (4): 341–349. [PubMed] [Google Scholar]
Lin X, Wisniewski M, Duman JG. Экспрессия двух самоусиливающихся белков-антифризов жука Dendroides canadensis в Arabidopsis thaliana . Завод Мол Биол Реп.2011; 29: 802–813. [Google Scholar]
Liu M, Liang Y, Wange Y, Zhang H, Wu G, Wang L, Qian H, Qi X. Влияние рекомбинантного морковного антифриза белка из Pichia pastoris GS115 на физико-химические свойства гидратированной глютена во время циклы замораживания-оттаивания. J Cereal Sci. 2018; 83: 245–251. [Google Scholar]
Мартинес-Парамо С., Перес-Серезалес С., Барбоса В., Роблес В., Херраес М. П.. Достижения в области криоконсервации эмбрионов рыб с использованием антифризов. Биол Репрод. 2008; 78: 152.[Google Scholar]
Мартинес-Парамо С., Перес-Серезалес С., Роблес В., Анель Л., Эрраес М. П.. Включение антифриза в эмбрионы рыбок данио неинвазивным методом. Криобиология. 2008. 56: 216–222. [PubMed] [Google Scholar]
Мартинес-Парамо С., Барбоса В., Перес-Серезалес С., Роблес В., Херраес М. П.. Криозащитные эффекты белков-антифризов, доставляемых в эмбрионы рыбок данио. Криобиология. 2009. 58: 128–133. [PubMed] [Google Scholar]
Маунсбах П.К., Моффатт Б., Тестильяно П., Рисуено М., Йе С., Гриффит М., Маунсбах А.Б.Гены, кодирующие белки-антифризы хитиназы, регулируются холодом и экспрессируются всеми типами клеток в побегах озимой ржи. Physiol Plantarum. 2001; 112: 359–371. [PubMed] [Google Scholar]
Meyer K, Keil M, Naldrett MJ. Богатый лейцином повторяющийся белок моркови, обладающий антифризной активностью. FEBS Lett. 1999; 447: 171–178. [PubMed] [Google Scholar]
Мурёи Н., Сато М., Канеко С., Кавахара Х., Обата Х., Яиш М.В., Гриффит М., Глик Б.Р. Клонирование и экспрессия afpA, гена, кодирующего антифризный белок из арктических растений, способствующих росту ризобактерий Pseudomonas putida GR12-2.J Bacteriol. 2004. 186 (17): 5661–5671. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
Найденко Т. Криоконсервант Crassostrea gigas ооцитов эмбрионов и личинок с использованием антиоксидантов эхинохромов A и антифриза AFP – I. Cryo Lett. 1997. 18: 375–382. [Google Scholar]
Neelakanta G, Hudson AM, Sultana H, Cooley L., Fikrig E. Экспрессия гликопротеина антифриза Ixodes scapularis повышает переносимость холода у Drosophila melanogaster . PLoS One.2012; 7: e33447. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
Newsted WJ, Polvi S, Papish B, Kendall E, Saleem M, Koch M, Hussain A, Cutler AJ, Georges F. Низкомолекулярный пептид из снежной плесени с эпитопная гомология антифриза зимней камбалы. Biochem Cell Biol. 1994. 72 (3-4): 152–156. [PubMed] [Google Scholar]
Никодемус Дж., О’Туса Дж. Э., Думан Дж. Дж. Экспрессия жука, Dendroides canadensis , антифриза белка в Drosophila melanogaster .J. Insect Physiol. 2006; 52: 888–896. [PubMed] [Google Scholar]
Нисидзима К., Танака М., Сакаи Й., Кошимото С., Моримото М., Ватанабе Т., Фан Дж., Китадзима С. Влияние антифриза типа III на криоконсервацию спермы и эмбрионов кроликов. Криобиология. 2014; 69: 22–25. [PubMed] [Google Scholar]
Olsen TM, Duman JG. Поддержание переохлажденного состояния в кишечнике перезимовавших личинок пирохроидного жука Dendroides canadensis: роль нуклеаторов льда кишечника и белков антифриза.J. Comp Physiol B. 1997; 167: 114–122. [Google Scholar]
Park KS, Do H, Lee JH, Park SI, Kim EJ, Kim SJ, Kang SH, Kim HJ. Характеристика связывающего лед белка арктических дрожжей Leucosporidium sp. AY30. Криобиология. 2012; 64: 286–296. [PubMed] [Google Scholar]
Паттерсон Дж. Л., Келли Т. Дж., Думан Дж. Дж. Очистка и состав белка, продуцирующего тепловой гистерезис из молочая клопа, Oncopeltus fasciatus . J. Comp Physiol. 1981. 142 (4): 539–542.[Google Scholar]
Pe PPW, Naing AH, Chung MY, Park KI, Kim CK (2019) Роль антифризовых белков (AFP) в регуляции генов, участвующих в реакции Hosta capitate на холод . 3 Biotech. 10.1007 / s13205-019-1859-5 [Бесплатная статья PMC] [PubMed]
Pertaya N, Marshall CB, Celik Y, Davies PL, Braslavsky I. Прямая визуализация антифриза белка елового почкопухового червя, взаимодействующего с кристаллами льда: сродство к базальной плоскости дает гиперактивность. Биофиз Дж. 2008; 95: 333–341.[Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
Pham L, Dahiya R, Rubinsky B. Исследование in vivo криохирургии адъюванта антифриза. Криобиология. 1999; 38: 169–175. [PubMed] [Google Scholar]
Праталингам Н.С., Холт В.В., Ревелл С.Г., Мирчук С., Флек Р.А., Уотсон П.Ф. Влияние белков-антифризов и гликопротеинов-антифризов на сперму крупного рогатого скота при замораживании-оттаивании. Териогенология. 2006; 66: 1894–1900. [PubMed] [Google Scholar]
Раймонд Дж. А., Фритсен С., Шен К. Связывающий лед белок из антарктической ледяной бактерии.FEMS Microbiol Ecol. 2007. 61: 214–221. [PubMed] [Google Scholar]
Regand A, Goff HD. Ингибирование перекристаллизации льда в мороженом под воздействием структурирующих лед белков из озимой пшеницы. J Dairy Sci. 2006; 89: 49–57. [PubMed] [Google Scholar]
Роблес В., Кабрита Е., Анельб Л., Херраез М.П. Микроинъекция антифриза типа III (AFPIII) в эмбрионы камбалы ( Scophthalmus maximus ): токсичность и распределение белков. Аквакультура. 2006; 261: 1299–1306. [Google Scholar]
Рубинский Б., Деврис А., Арав А. (1994) Взаимодействие белка теплового гистерезиса с клетками и клеточными мембранами и связанные с ними приложения.Патент США 5358931
Rubinsky B, Arav A, Fletcher GL. Гипотермическая защита — фундаментальное свойство белков-антифризов. Biochem Biophys Res Comm. 1991; 180: 566–571. [PubMed] [Google Scholar]
Рубинский Б., Маттиоли М., Арав А., Барбони Б., Флетчер Г.Л. Ингибирование токов Ca ++ и K + белками-антифризами. Am J Physiol. 1992; 262: 542–545. [PubMed] [Google Scholar]
Рубинский Б., Арав А., Хонг Дж. С., Ли Си. Замораживание печени млекопитающих глицерином и антифризами.Biochem Biophys Res Commun. 1994; 200: 732–741. [PubMed] [Google Scholar]
Scholander PF, van Dam L, Kanwisher JW, Hammel HT, Gordon MS. Переохлаждение и осморегуляция у арктических рыб. J Cell Comp Physiol. 1957; 49: 5–24. [Google Scholar]
Со Дж. Х., Наинг А. Х., Чон С. М., Ким С. К.. Антизамороженный белок типа III сильно влияет на экспрессию соответствующих генов в криоконсервированных кончиках побегов картофеля. Завод Мол Биол. 2018; 97: 347–355. [PubMed] [Google Scholar]
Sicheri F, Yang DS.Структура и механизм связывания льда антифриза из камбалы озимой. Природа. 1995; 375: 427–431. [PubMed] [Google Scholar]
Sidebottom C, Бакли С., Падни П., Твигг С., Джарман С., Холт С., Телфорд Дж., Макартур А., Уорролл Д., Хаббард Р., Лилфорд П. Термостойкий антифризный белок из травы. Природа. 2000; 406: 256. [PubMed] [Google Scholar]
Сингх П., Ханада Й., Сингх С.М., Цуда С. Активность антифриза в арктических криоконитовых бактериях. FEMS Microbiol Lett. 2014; 351 (1): 14–22.[PubMed] [Google Scholar]
Солтыс К.А., Батта А.К., Конеру Б. Успешное незамораживание, сохранение ниже нуля печени крысы с помощью 2,3-бутандиола и антифриза типа I. J Surg Res. 2001; 96: 30–34. [PubMed] [Google Scholar]
Тейлор Р., Флетчер Р. Криоконсервация эукариотических водорослей — обзор методик. J Appl Phycol. 1998; 10: 481–501. [Google Scholar]
Тейлор Р., Флетчер Р.Л. Простой метод замораживания зооспор зеленой макроводоросли Enteromorpha Кишечник .J Appl Phycol. 1999; 11: 257–262. [Google Scholar]
Талер Р., Спитцер С., Карлик Х., Клаусхофер К., Варга Ф. ДМСО является сильным индуктором гидроксиметилирования ДНК в преостеобластических клетках MC3T3-E1. Эпигенетика. 2012; 7: 635–651. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
Tomczak MM, Marshall CB, Gilbert JA, Davies PL. Простой метод определения ингибирования перекристаллизации льда антифризными белками. Biochem Biophys Res Commun. 2003; 311: 1041–1046. [PubMed] [Google Scholar]
Улиг К., Кабиш Дж., Палм Дж. Дж., Валентин К., Шведер Т., Крелл А.Гетерологическая экспрессия, рефолдинг и функциональная характеристика двух антифризовых белков из Fragilariopsis cylindrus (Bacillariophyceae) Cryobiology. 2011; 63: 220–228. [PubMed] [Google Scholar]
Uperti GC, Payen SR, Duganzich DM, Oliver JE, Smith JF. Утечка фермента при криоконсервировании сперматозоидов барана. Anim Reprod. Sci. 1996. 41: 27–36. [Google Scholar]
Wallis JG, Wang H, Guerra DJ. Экспрессия синтетического антифриза в картофеле снижает выделение электролита при отрицательных температурах.Завод Мол Биол. 1997. 35: 323–330. [PubMed] [Google Scholar]
Ван Дж. Х., Хуанг Си. Протеины-антифризы: в гипотермической и криогенной консервации. Китайский J Cell Biol. 1996; 18: 107–111. [Google Scholar]
Ван Р., Чжан П., Гонг З., Хью К.Л. Экспрессия гена антифриза у трансгенных золотых рыбок ( Carassius auratus ) и ее влияние на адаптацию к холоду. Мол Мар Биол Биотехнология. 1995; 4: 20–26. [PubMed] [Google Scholar]
Ван Дж. Х., Биан Х. В., Хуанг С. Н., Дж. Дж. Ге.Исследования по применению антифризов в криоконсервации клеток эмбриогенной суспензии риса. Acta Biol Exp Sinica. 1999. 32: 271–276. [PubMed] [Google Scholar]
Ван Дж. Х., Биан Х. У., Чжан Ю. X, Ченг Х. П.. Двойное действие антифриза на криоконсервацию эмбриогенных суспензионных клеток риса ( Oryza sativa L.). Cryo Lett. 2001. 22: 175–182. [PubMed] [Google Scholar]
Wang Y, Qiu L, Dai C, Wang J, Luo J, Zhang F, Ma J. Экспрессия антифриза, белка MpAFP149 насекомого ( Microdera puntipennis dzungarica ) придает устойчивость к холоду трансгенному табаку .Реплика растительных клеток 2008; 27: 1349–1358. [PubMed] [Google Scholar]
Wisniewski M, Webb R, Balsamo R, Close TJ, Yu XM, Griffith M. Очистка, иммунолокализация, криопротекторная и антифризная активность PCA60: дегидрин из персика ( Prunus persica ) Physiol Растение. 1999; 105: 600–608. [Google Scholar]
Worrall D, Elias L, Ashford D, Smallwood M, Sidebottom C, Lillford P, Telford J, Holt C., Bowles D. Богатый лейцином повторяющийся белок моркови, который препятствует перекристаллизации льда.Наука. 1998. 282: 115–117. [PubMed] [Google Scholar]
Wu DW, Duman JG, Cheng CHC, Castellino FJ. Очистка и характеристика белков-антифризов личинок жука Dendroides canadensis . J. Comp Physiol B. 1991; 161: 271–278. [Google Scholar]
Yeh S, Moffatt BA, Griffith M, Xiong F, Yang DSC, Wiseman SB, Sarhan F, Danyluk J, Xue YQ, Hew CL, Doherty-Kirby A, Lajoie G.

Как изготовить незамерзайку за 5 минут в домашних условиях

Из чего можно сделать незамерзайку?

Приготовление домашней незамерзайки на основе изопропилового спирта

Проверка домашней незамерзайки на качество

Из чего еще можно сделать незамерзайку своими руками?

Техника пользования незамерзайкой

Производство незамерзайки до -30

Изготовление незамерзайки

В Зеленограде закрыли незаконное производство «незамерзайки»

Незамерзайка своими руками в домашних условиях: состав, пропорции.

Как сделать незамерзайку в домашних условиях.

Борьба с незамерзайкой. Правительство намерено взять метанол под полный контроль

Производство незамерзающей жидкости как бизнес

Конкуренция

Помещение

Оборудование

Ингредиенты

Персонал

Процесс производства

Сезонность

Сбыт

Познавательное видео к просмотру для нашей аудитории

Еще записи по теме

Свой бизнес: производство «незамерзайки»

Производство антифриза — Blending.GlobeCore.com

Antifreeze — обзор | Темы ScienceDirect

Антифризные белки

Протеины-антифризы — обзор

17.6.2 Протеины-антифризы

Что такое антифриз? | Блог химии

Почему антифриз бывает разных цветов?

Антифриз — это то же самое, что охлаждающая жидкость?

Состав и применение антифризов антарктических бактерий | Microbial Cell Factories

Белки-антифризы и их практическое применение в промышленности, медицине и сельском хозяйстве

Антиинфекционные (антивирулентные) свойства AFP

Криомедицина (криоконсервация / криохирургия)

Криоконсервация клеток и тканей

Трансплантация органов

Краткий обзор применения белков-антифризов в криоконсервации и метаболической генной инженерии

Аунг Хтай Наинг

Чанг Кил Ким

Abstract

Введение

Источник белков-антифризов

Механизм действия и роль белков-антифризов

Классификация белков-антифризов на основе активности

Классификация белков-антифризов на основе значений TH

Применение протеинов-антифризов

Применение АФП при криоконсервации

Применение AFP для криоконсервации клеток, тканей и органов животных

Применение AFP для криоконсервации растительных клеток, тканей и органов

Применение AFP в метаболической генной инженерии

Заключение

Перспективы на будущее

Вклад авторов

Финансирование

Соблюдение этических стандартов

Ссылки

alexxlab

Comments

Добавить комментарий Отменить ответ